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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提不出质粒
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】提不出质粒

用爱思进的盒子从大肠杆菌里面提质粒，再加完S3后10000r/min离心10min，为什么有的菌沉淀离不到底部呢，还是在溶液中悬浮着，提完质粒后跑胶这样的一般都检测不到质粒
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1楼 2010-08-19 11:38:21
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
空谷幽风(金币+1):谢谢！ 2010-08-19 11:48:47
首先保证你的菌没问题，操作中染杂菌是再正常不过的事情了
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2楼2010-08-19 11:43:28
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bunny0512

银虫 (小有名气)
空谷幽风(金币+1): 2010-08-19 11:49:28
看这个情况确实是菌有问题,爱思进的盒子很好,我们提大肠的时候一般S3离心絮状物都离到底部去了,很干净,用博迈得的就差一些,有小沉淀在壁上.
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在哪里~在哪里见过你~
3楼2010-08-19 11:48:22
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j2

木虫 (正式写手)
空谷幽风(金币+1): 2010-08-28 10:01:01
如果悬浮的量多，你不妨试试将上清液移到新EP管重新离心一次，时间可适当缩短
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2010-08-19 12:56:25
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夜龙舞

金虫 (小有名气)
空谷幽风(金币+1): 2010-08-23 18:59:24
首先看是不是低拷贝质粒，然后呢菌不易摇的时间过长，OD0.6-0.8最好。菌过老的话会出现裂解物太多有时弥散的样子，多离心几次，过柱子是第一次加混合液体时，重复一次，最后洗脱时重复一次，可以提高产率。
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5楼2010-08-19 13:05:19
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月月大可

木虫 (著名写手)
空谷幽风(金币+1): 2010-08-23 18:59:48
赞同2楼说法，给我的感觉是你的菌不是大肠杆菌，而是杂菌。
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6楼2010-08-19 13:08:43
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cqyniu

金虫 (小有名气)
空谷幽风(金币+1): 2010-08-23 18:59:40
第二步加S2后放置的时间不能太长的。你的菌液好像也有问题
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7楼2010-08-19 15:25:59
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sadc

木虫 (正式写手)
空谷幽风(金币+1): 2010-08-23 18:59:44
1. 染菌了；
2. 菌长老了。
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8楼2010-08-23 18:41:34
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320080920001

金虫 (正式写手)
空谷幽风(金币+1): 2010-08-28 10:00:48
会不会是第二步没有充分裂解，造成提不出质粒。我去的一个实验室就有一次因为没有温和的混匀S2加入后的溶液，加入异丙醇离心后就没东西。
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9楼2010-08-23 20:17:13
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