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ninglz

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】RAPD引物问题求助

在做RAPD时,需要从很多条引物中筛选到能扩增出条带的几十条引物,然后怎么分析呢?我只知道大体的步骤如下:
1)对于每一天引物扩增出来的条件需要转换成0/1模式,然后怎么把所有引物扩张的条带综合起来呢?
2)是不是用软件大体分析一下每个引物扩增的条带大小(...bp),然后按照一定的顺序(比如说按照bp数从大到小)把所有引物扩增的全部条带排列,最后转换成0/1模式,然后再用相关的软件进行聚类分析呢?
要不然的话,筛了那么多条引物做啥用呢?
请各位XDJM多多指教!!!

说了那么多,我就是想问问:是不是最后要把所有引物扩增的条带综合在一起?比如说:有8组DNA(即8个品种的基因组),筛选到20条引物,最后就需要做一个0/1模式的8列表,每一列代表一组DNA,这一列的0/1模式是由20条引物以该组DNA为模板扩增的所有条带转换而来的,最后通过相关的软件进行分析?

麻烦大家啦!!!!!!!!
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reasonspare

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4):good~! 2010-08-11 20:31:17
引用回帖:
Originally posted by ninglz at 2010-08-11 00:14:20:
在做RAPD时,需要从很多条引物中筛选到能扩增出条带的几十条引物,然后怎么分析呢?我只知道大体的步骤如下:
1)对于每一天引物扩增出来的条件需要转换成0/1模式,然后怎么把所有引物扩张的条带综合起来呢?
2 ...

是不是最后要把所有引物扩增的条带综合在一起?

看你干什么:找biomarker,不用综合,看多样性:要组合

比如说:有8组DNA(即8个品种的基因组),筛选到20条引物,最后就需要做一个0/1模式的8列表,每一列代表一组DNA,这一列的0/1模式是由20条引物以该组DNA为模板扩增的所有条带转换而来的,最后通过相关的软件进行分析?

手工作做,可以。幸亏你的不同,又是Rapd,如果给你100株,做个AFLP 或者SDS-PAGE。不弄你一个头昏眼花才怪呢。

关于软件分析:读胶软件很多,有花钱的,有免费。
就你的问题而言:一般的统计学软件,很难完成分析。

最权威的Gelcomp。能够从头到尾,帮你完成,,尤其是1个样品几十条RAPD类型的组合类型。
大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
3楼2010-08-11 08:03:59
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ninglz

木虫 (小有名气)

reasonspare:条带处理DICE法,通常加合方法,Pearson 法,聚类方法:UPGMA 方法。如果还有一问我们可以深入探讨@http://emuch.net/bbs/viewthread. ... p;page=1#pid1224340 2010-08-12 05:11:52
引用回帖:
Originally posted by reasonspare at 2010-08-11 08:03:59:


是不是最后要把所有引物扩增的条带综合在一起?

看你干什么:找biomarker,不用综合,看多样性:要组合

比如说:有8组DNA(即8个品种的基因组),筛选到20条引物,最后就需要做一个0/1模式的8列表,每一 ...

您好!您好像没有理解我的问题:
我知道需要把所有筛选出来的引物的条带综合其来,弄成0/1模式
我是问到底怎么综合???
对于同一个DNA模板而言,是简单的把每条引物的扩增条带弄成0/1模式,并机械地罗列在一起呢,还是把所有引物扩增的条带先按照bp数大小排列,再转换成0/1模式表呢?
您能看明白了吗????????
6楼2010-08-11 11:40:57
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reasonspare

木虫 (著名写手)

ninglz(金币+1): 2010-08-12 17:30:35
引用回帖:
Originally posted by ninglz at 2010-08-11 11:40:57:

您好!您好像没有理解我的问题:
我知道需要把所有筛选出来的引物的条带综合其来,弄成0/1模式
我是问到底怎么综合???
对于同一个DNA模板而言,是简单的把每条引物的扩增条带弄成0/1模式,并机械地罗列在 ...

你那样的加合,肯定不对的,除非你找到有人用你的方法发表过文章,否则,还是想帮法借助软件,

条带处理DICE法,通常加合方法,Pearson 法,聚类方法:UPGMA 方法。如果还有一问我们可以深入探讨@http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2281755&pid=1224340&page=1#pid1224340
大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
7楼2010-08-12 05:01:31
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ninglz

木虫 (小有名气)

reasonspare:我不知道你看明白了没有? 你问了三次,我回答了三次,加和采用pearson法(常用) 2010-08-13 05:29:12
引用回帖:
Originally posted by reasonspare at 2010-08-12 05:01:31:


你那样的加合,肯定不对的,除非你找到有人用你的方法发表过文章,否则,还是想帮法借助软件,

条带处理DICE法,通常加合方法,Pearson 法,聚类方法:UPGMA 方法。如果还有一问我们可以深入探讨@[url]htt ...

您好,我不是加合,我是用相关软件分析的,就是用聚类分析中的UPGMA 方法,可是得事先将实验条带转换成0/1模式,然后才能用软件分析,我向您请教的就是这个成0/1模式的排序问题,呵呵,您现在能看明白了吗???
8楼2010-08-12 10:15:09
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