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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA连接前后大小一样咋回事?
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呆米11

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA连接前后大小一样咋回事? 已有5人参与

各位虫友:我今天遇到一个问题想向大家请教一下:
   
我做基因克隆,用引物扩出来的片段是500bp,条带很清楚,我用T4连接酶,用的DH5a感受态细胞,做的连接,连完后做菌液PCR,电泳结果是都是在500bp处,有很亮的条带,如果连上了,条带肯定会大个一百多,如果没连上咋会有500的条带呢? 想问一下,这可能是什么原因?  谢谢!
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1楼 2010-08-02 21:56:20
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xmasylm

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用的是什么引物做的pcr检测，载体引物会大于500bp，如果是原片段引物就是500bp，建议lz做酶切鉴定，酶切比pcr可靠。
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4楼2010-08-02 23:20:52
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用的是通用引物检测的，还是原来的PCR引物啊，要是原来的PCR引物，应该就是500bp
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2楼2010-08-02 22:14:22
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被太阳追逐

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最好是提个质粒酶切或测序，个人感觉菌液或菌落pcr假阳性会很高
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3楼2010-08-02 22:19:55
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-08-03 05:52:49
我觉得应该是对的，你拿原先500的片段做对照，电泳时间长点，应该能看出来的。
直接测序吧  ！
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-08-03 00:28:14
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