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xucan0901

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】4kb片段的连接已有7人参与

4kb大小的dna片段，我已经连接了3个月了，pMD-18T和其他的表达载体我都连接过，刚开始以为pcr产物浓度不够高，后来我加大pcr的量，还是连接不上，有时候一次提取30个质粒都是假阳性，请问高手怎样才能使4kb的片段连上啊？
在这样下去我快疯了！

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1楼 2010-07-30 12:44:24

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xucan0901

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引用回帖:

Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-30 14:42:45:

我用LA Taq扩的6kb多片段可以连接到T载体（TAKARA，pMD-20）。但同步做的5k和4k的片段没连上，当然也有4k的片段已经成功了。与lz一样，转化后菌落PCR总是假阳性。

你的意思是说，大片段的连接只是概率和运气的问题了吗？