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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】跑胶
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】跑胶 已有9人参与


各位师兄师姐好，小妹半道转入分子生物学，刚起步，遇到很多问题得向大家求教。这是新近跑的琼脂糖电泳图，胶浓度1.5%，1*TAE，10*loading buffer，恒压90v，DL2000的marker，样品条带波浪形可能是什么原因呢，之前没有，换了电泳液也还是同样的情形。
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1楼 2010-07-14 14:21:57
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-07-17 13:33:07
可能是拔梳子的时候猛了一点，把梳孔弄得不均匀了，另外可能是用了比较厚的梳子，但是点样量又很少，造成分布不均匀
其实薄梳子跑出来的条带很漂亮哦
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5楼2010-07-14 15:04:14
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-15 04:02:34
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Originally posted by lhm_hnyj at 2010-07-14 15:36:38:

谢谢哦，说得很有道理，确实点样时发现量挺少的。那就是说把胶铺薄一点对吧，梳子倒是用了最小号的

胶的厚薄倒没有多大的影响
一方面，你可以让胶凝久一点，硬一点再拔梳子，同时拔之前用buffer润一下梳孔再拔，这样不容易拔烂梳孔
另一方面，点样的时候如果发现体积太小，比如才两三微升，那么可以加多点loading buffer，让样品有足够的体积可以扩散到梳孔的底部，一般5ul就能铺满最薄的那种梳子，0.75um的似乎是
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10楼2010-07-14 16:07:02
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-07-15 04:02:52
引用回帖:
Originally posted by lhm_hnyj at 2010-07-14 20:00:40:

再次感谢，我试试胶铺薄点再试试，一般电压控制多大比较好呢

100V左右可以跑得很漂亮了~~你用的90V电压没问题
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15楼2010-07-14 23:40:34
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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Originally posted by lhm_hnyj at 2010-07-17 12:58:55:

呵呵，您太伟大了，按您说的改进后，这个问题解决了

不客气，能解决问题我也很开心
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17楼2010-07-18 15:23:54
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