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hunter3401

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】模板浓度对PCR的影响 已有4人参与

模板浓度会对PCR产生影响,如果浓度高了,其PCR的其他要素或者说原料(Taq酶,dNTPs,引物,Mg2+)分配于每块模板(DNA链)的量相对于低浓度时就低很多,有时候甚至要很多模板去竞争一份原料。当PCR反应进行时,有很多的非特异性的条带成涂抹状!而自己的特异条带很淡甚至没有!如果浓度低的 会是什么影响?如果用热裂解法来做制备模板的话如何控制模板在合适的浓度范围?
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-24 17:56:52
浓度低倒不怕,只要酶够强劲,fg级别的都能扩出来
高了就恶心了……
浓度范围?测个紫外吸收不就知道了
3楼2010-06-24 17:42:14
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琴瑟不鸣

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-06-24 23:35:18
模板最后是要稀释在合适的范围的,太低了,你目的产物的量会很少的
老虎
2楼2010-06-24 17:20:53
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-06-24 23:35:31
除非是用纯化过的高拷贝DNA(比如纯化的质粒)做模板,模板浓度一般不会高到影响结果的程度。如果是质粒做模板,倒是一定要稀释到足够稀

基因组做模板的话,用多少要看基因组的复杂程度

不知道楼主所谓热裂解法裂解的是什么?如果是菌体,挑一点就行,没个多少
4楼2010-06-24 20:09:33
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huaq1984

银虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
模板浓度不能太高,动物基因组一般1微克就够了,细菌的1ng
5楼2010-06-24 21:12:45
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