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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】模板浓度对PCR的影响
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hunter3401

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】模板浓度对PCR的影响 已有4人参与

模板浓度会对PCR产生影响，如果浓度高了，其PCR的其他要素或者说原料（Taq酶，dNTPs，引物，Mg2+）分配于每块模板（DNA链）的量相对于低浓度时就低很多，有时候甚至要很多模板去竞争一份原料。当PCR反应进行时，有很多的非特异性的条带成涂抹状！而自己的特异条带很淡甚至没有！如果浓度低的 会是什么影响？如果用热裂解法来做制备模板的话如何控制模板在合适的浓度范围？
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1楼 2010-06-22 07:43:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-24 17:56:52
浓度低倒不怕，只要酶够强劲，fg级别的都能扩出来
高了就恶心了……
浓度范围？测个紫外吸收不就知道了
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3楼2010-06-24 17:42:14
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琴瑟不鸣

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-24 23:35:18
模板最后是要稀释在合适的范围的，太低了，你目的产物的量会很少的
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老虎
2楼2010-06-24 17:20:53
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-06-24 23:35:31
除非是用纯化过的高拷贝DNA（比如纯化的质粒）做模板，模板浓度一般不会高到影响结果的程度。如果是质粒做模板，倒是一定要稀释到足够稀

基因组做模板的话，用多少要看基因组的复杂程度

不知道楼主所谓热裂解法裂解的是什么？如果是菌体，挑一点就行，没个多少
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4楼2010-06-24 20:09:33
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huaq1984

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
模板浓度不能太高，动物基因组一般1微克就够了，细菌的1ng
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5楼2010-06-24 21:12:45
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