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狄林

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[交流] 【求助/交流】AFLP的产物片段大已有4人参与

最近做AFLP的预扩产物在200-2000bp,选扩产物从200到2000以上均有拖带,在大板上是颜色比较深的拖带,没有明显条带.以前同一连接产物预扩产物在100-1500bp,选扩产物从200到750.
做过如下尝试:换了内切酶,引物,接头,连接酶;mg离子减小到0.8;将酶用量加大一倍,时间延长到14h;预扩退火温度提高到58度;延伸时间都从2分减到1分;可选扩产物片段还是在2000左右.
敬请高手指点.谢谢!

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1楼 2010-06-16 01:03:53

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狄林

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我用的mseI,ferments的,双酶切用的tango buffer,单切也用的是这个buffer.麻烦您指点现在该怎么办呀.MseI加大酶量和时间好象作用不大.

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8楼2010-06-18 20:49:03

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xyls6868

新虫 (小有名气)

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狄林(金币+1): 2010-06-18 13:00:48

引用回帖:

Originally posted by 狄林 at 2010-06-16 01:03:53:
最近做AFLP的预扩产物在200-2000bp,选扩产物从200到2000以上均有拖带,在大板上是颜色比较深的拖带,没有明显条带.以前同一连接产物预扩产物在100-1500bp,选扩产物从200到750.
做过如下尝试:换了内切酶,引物,接头, ...

拖带的话，有可能是胶有问题

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2楼2010-06-17 14:26:50

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