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dongfangzz

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于RNA提取后DNaseⅠ的处理 已有8人参与

三个问题:
1、要做Real-time PCR。总RNA提取后,RNA中DNaseⅠ的处理是常规的步骤还是可做可不做?
2、用苯酚/氯仿抽提法去除DNaseⅠ时,有资料说 加入10μl 3M的醋酸钠,250μl 冷乙醇,冰上放置10分钟。该步的冷乙醇是无水乙醇还是70%的乙醇。后面的步骤用的是70%的乙醇(标明的)。而该处没标明浓度,很迷惑!
3、问题2中的 10μl 3M的醋酸钠 ,其中的3M 是什么意思?是浓度吗?但是浓度也不是这么表示的呀?
                                                            
                                                       谢谢

[ Last edited by dongfangzz on 2010-6-4 at 12:20 ]
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yijunliu

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
366414楼: Originally posted by yangym1123 at 2010-06-04 21:23:54
一般是需要处理RNA中的基因组DNA的,即使电泳看不到DNA的污染,09年的一篇文章给出了荧光定量PCR发SCI论文的要求:MIQE,Google学术搜一下第一篇即是,处理基因组DNA是为了避免基因组污染的一个环节,还有跨内含子设 ...

您好,我想请教您一下,我也是用试剂盒提取出RNA,然后用fermentas的DNaseI处理后,再用fermentas的逆转录试剂盒进行逆转录的,想问您一个问题,用DNA酶处理后再用EDTA失活后,还需要进行RNA的纯化吗?还是可以直接就做反转录啊?谢谢您的回答!
12楼2013-01-10 15:40:27
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+3):谢谢交流 2010-06-04 13:43:12
1.理论上说RNA中没有基因组DNA污染可不做,建议做。否则残留gDNA影响定量

2.无水乙醇

3. 浓度,3M=3mol/L。M是mol/L的简称
2楼2010-06-04 12:57:25
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cqyniu

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同意楼上的意见,一直是用M代表浓度的啊M是mol/L
3楼2010-06-04 16:08:19
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-04 17:25:53
总RNA提取后,用RNA做模板,扩一下内参或表达水平高的基因,35个循环,如果无预期的带,则可不做DNaseⅠ处理。
4楼2010-06-04 17:12:58
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