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曹艳辉

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】为什么内切酶总是切不开我的DNA已有11人参与

为什么内切酶总是切不开我的DNA，我用了好多种酶进行酶切，但是最后还是切不开，是怎么回事啊？请哪位高手指点一下。

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1楼2010-05-31 11:01:32

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ben1147

木虫 (正式写手)

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★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):正解~~~ 2010-05-31 22:36:07

引用回帖:

Originally posted by 曹艳辉 at 2010-05-31 13:24:31:
首先谢谢各位好心人了！我是用苯酚氯仿混合抽提两次，-20度无水乙醇沉淀一小时，75%乙醇再沉淀，用双蒸水悬浮的染色体，我的基因组是放线菌的，最终提取的基因组蛋白质含量很高，怎样才能降解这些蛋白质啊？

氯仿抽提两次怎么会还有很多蛋白呢？吸上清的时候吸到中间层了？

酚:氯仿抽提完以后要拿氯仿单独抽一次，把水相中残余的酚抽提掉（苯酚微溶于水）

如果确认样品里蛋白多的话，用蛋白酶K消化一下，再用酚氯仿、氯仿抽提。

感觉提DNA的步骤可能有问题，不应该有这么多蛋白的。前面提取的步骤里有没有用溶菌酶或者蛋白酶？

另外乙醇沉淀以后75%乙醇洗的时候尽量把沉淀悬起来，再多泡一会，还可以洗两次，每次都要把上次残余的液体吸干净，尽量把盐离子除的干净一点，防止影响酶切体系的离子浓度

[ Last edited by ben1147 on 2010-5-31 at 15:24 ]