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【求助/交流】葡萄糖氧化酶酶活的测定方法已有10人参与
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| 我是第一次发帖，也没有金币可以贡献，不过希望大家帮帮忙，我用的是分光光度计来测定葡萄糖氧化酶的酶活，可是每次测定的值和实际值相差很多，大家看看还有没有其他的方法可以测定葡萄糖氧化酶的酶活！谢谢各位大侠了！ |
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 酶工程 | 生工检测理论与实务 |
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2楼2010-05-26 11:09:13
3楼2010-05-26 15:45:27
4楼2010-05-26 15:49:51
5楼2010-05-26 15:56:47
6楼2010-05-26 16:31:31
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我使用的检验原理是： 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成D-吡喃葡萄糖酸-1,5-内酯以及过氧化氢。就是利用反应生成的过氧化氢将还原性染料（邻联茴香氨）转化为氧化性染料，反应条件是25摄氏度，pH为7.0。 检测方法是： 将配置好的底物溶液（0.066mg/mL的邻联茴香氨溶液、10%葡萄糖溶液、过氧化氢溶液）放在25摄氏度水浴锅中平衡5分钟，然后加入稀释至0、2U/mL的葡萄糖氧化酶溶液，放入分光光度计中436nm下记录5min内吸光度值的郑家，根据线性曲线计算每分钟吸光度值的变化量（△E），根据公式：Volume activity（U/mL）=△E*3.72*稀释因子计算酶活 购买过来的葡萄糖氧化酶瓶身上有标记的酶活，然后我们将测得的酶活和标记的酶活做对比，计算百分比，但是每次我测得的百分比都要没有达到100%正负10%范围内，那说明我的酶活测定肯定有问题，酶蛋白是不需要测定的。 |
7楼2010-05-27 10:35:04
8楼2010-05-28 11:26:39
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):很好的经验~~ 2010-05-29 21:27:13
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):很好的经验~~ 2010-05-29 21:27:13
| 我只能给出大概的建议，不保证一定正确啊。测定酶活性应该在底物过量的前提下，测定初始酶活，对吗？看到你所给出的体系中，有标准的0.2U/mL的葡萄糖氧化酶溶液，能否这样做？将这个0、2U/mL的葡萄糖氧化酶溶液再稀释2、4、8倍，根据你的方法获得分别稀释0、2、4、8倍的酶活单位，然后将这四个数字进行线性拟合。如果这四个数值拟合R2值在95%以上，你就可以大概认为这是一条标准曲线。然后按照你所说的偏差值进行一次换算即可，不必非要考虑酶活是否有问题了。不知道我讲清楚了没有？祝你好运。 |
9楼2010-05-29 20:07:34
10楼2010-06-01 10:27:55