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songwangpan

金虫 (小有名气)

[求助] 用葡萄糖氧化酶做循环伏安法时候出不来峰值

我在铁氰化钾溶液中用循环伏安法测试,可以出的来峰值

但是在电极上加入葡萄糖氧化酶后,在葡萄糖+PBS溶液中,用循环伏安法测试,

却出不了峰值

是因为酶失活还是因为别而原因呢,平时酶都是在4℃下保存,操作也基本没有在

室温下太久

PS.  之前如果把酶滴在材料上,酶会消失,现在的方法是把酶和材料混合在一起,

再滴入电极上
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

songwangpan(金币+12): 你说的和我做的是一样的,那通氮气除氧的PBS里到底需不需要加上葡萄糖呀? 2011-05-27 10:33:34
justinzhao(ECEPI+1): 奖励应助!呵呵 2011-05-27 11:48:35
同学  估计你是在打磨后的电极表面上修饰了纳米材料吧  这个时候  你应该把空白电极和修饰好了的电极在铁氰化钾溶液(最好选用铁氰化钾、亚铁氰化钾电对(5mM, 1:1)并以以0.1M KCl为支持电解质)中做CV扫描,如果你的修饰物为导电的,则修饰电极的电流应该比空白电极大,这只是证明纳米材料可以导电的。嗯,之后你可能是用滴涂法在电极表面滴涂GOD吧,假设你的GOD固定在了电极表面且没有失活  那么在通氮除氧的PBS中,在0.1V到-0.7V的电位窗口,能够在-0.4到-0.6V左右(SCE、Ag/AgCl)能够看到GOD的循环伏安峰。如果没有,那么你的GOD多半没有固定上去。失没失活,因为我没做过,就不好说了,请参照7楼那位同学的方法试试。此外,向PBS中通氧或者通氮的现象是不同的,请多看看文献吧。呵呵,恭祝实验顺利。
9楼2011-05-26 20:39:45
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=虫虫=

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

内容已删除
3楼2011-05-26 08:41:11
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xiao_lei12

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
justinzhao(金币+3): 奖励应助 2011-05-27 11:48:00
在铁氰化钾溶液中用循环伏安法测试,出峰 ,只能说明你的电极没问题。
在电极上加入葡萄糖氧化酶后,在葡萄糖+PBS溶液中,用循环伏安法测试,你扫描的如果是正电位区,应该会有峰。这个峰是过氧化氢产生的。扫负电位区,需要除氧,这是酶在电极上的直接电化学。
判断是否是酶失活的方法,可以把电极电位设在+0.8V左右,用电流时间曲线法,试试加葡萄糖前后是否有电流的变化。
7楼2011-05-26 10:39:23
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358733179

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

songwangpan(金币+8): 石墨烯,据文献说是可以实现直接电子转移的。 2011-05-26 12:16:52
你合成的材料能实现直接电子转移吗,如果能的话就应该有峰
如果不能,就必须加入电子介体才能有峰
6楼2011-05-26 10:01:24
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=虫虫=

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
justinzhao(金币+3): 奖励应助 2011-05-27 11:47:31
引用回帖:
Originally posted by songwangpan at 2011-05-26 09:23:34:
回帖就回帖,有必要把话说的这么难听吗?
我是刚开始做电化学,本来就不是很懂,只是参考文献这么做的,文献里就是用的PBS,但我写的是我用的PBS+glucose,如果不用这个,那请问要用什么?

我哪里说的难听?我是看不懂才加个问号,直接电化学本来就不好做,如果你做出来当然是恭喜你。如果确实是伤害了,抱歉是我多嘴,不好意思请见谅
10楼2011-05-27 08:34:18
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

★ ★ ★
justinzhao(金币+3): 奖励应助 2011-05-27 11:47:04
嗯  我觉得要分成两个实验做:1. 如果在通氮除氧的PBS中作出GOD的氧化还原峰了,建议你先做扫速与峰电流、峰电位的关系实验。这个实验完成后,就可以向PBS中加入葡萄糖,搅拌,然后停止,在不搅拌的条件下在相同的电位窗口下做循环伏安实验,看此时的还原峰电流或者氧化峰电流有没有变化(增大或者减小都可以,有变化就行。我在通氮除氧的PBS得到的结果是加入葡萄糖后,还原峰电流增大)。2. 如果你在空白PBS中没有得到一对明显的氧化还原峰,就不用再加入葡萄糖了,因为没有峰出现就说明GOD根本没上去,即使加入葡萄糖也应该没有响应。

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16楼2011-05-27 11:14:14
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marco5533

银虫 (小有名气)

插上一句,我做的是酶电极,不过不是滴涂法!做酶传感器,有的时候CV图真的不好做出来,比如待测物浓度大了就测不出来了等等。后来我用DPV做了,发现效果很好.但是翻阅文献,做酶的基本上都是用i-t曲线来做的,i-t曲线时间间隔短的话,就会呈现一个向下的弧线,而根本就不应该是呈阶梯状的曲线。上面有虫友说有可能是用 orgin平滑了,我觉得应该有点;但是主要还是他们把时间拉长了,比如时间间隔1min,或者5min,这样就可以做出阶梯状的曲线。
另外,电极捕捉h2o2是个相对缓慢的过程(相对与铁氰化钾探针分子来说),所以说做cv图的时候是不是得静止一段时间,不然数据会很不稳定的!
23楼2011-06-02 10:35:11
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

引用回帖:
Originally posted by wahds at 2011-06-01 21:47:06:
请教一下,你选择的还原电位是-0.57V,那是检测过氧化氢的还原电流吗?我看文献上过氧化氢的还原电流在+0.15V,你选择-0.57V是什么的还原电位呢?谢谢

嗯  请教不敢当 说实话 我也不清楚我在此点电位下检测的是啥物质的还原电流,我当时只是看到GOD的在此电位下出现了一个还原峰,加入葡萄糖后还原峰电流增大,所以在计时电流法中采用此电位为工作电位   后一个问题  我想问下您看到的是什么电极作为工作电极了  我所看个的几篇文献 因为是采用血红蛋白、辣根过氧化物酶、细胞色素c修饰物制备的  所以它的还原电位是在负电位区
24楼2011-06-02 11:06:23
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逍遥杰001

木虫 (职业作家)

27楼2011-06-02 14:35:12
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普通回帖

lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

葡萄糖氧化酶估计没有固定到电极上哦  你做DET的吧
2楼2011-05-26 08:38:42
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songwangpan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lifucheng at 2011-05-26 08:38:42:
葡萄糖氧化酶估计没有固定到电极上哦  你做DET的吧

是的,是做DET的
4楼2011-05-26 09:14:46
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songwangpan

金虫 (小有名气)

内容已删除
5楼2011-05-26 09:23:34
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songwangpan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiao_lei12 at 2011-05-26 10:39:23:
在铁氰化钾溶液中用循环伏安法测试,出峰 ,只能说明你的电极没问题。
在电极上加入葡萄糖氧化酶后,在葡萄糖+PBS溶液中,用循环伏安法测试,你扫描的如果是正电位区,应该会有峰。这个峰是过氧化氢产生的。扫负 ...

我在glucose+PBS中测试之前,都有通氮气除氧,结果正负电位区都没有峰值出来,情况就是这样的。
8楼2011-05-26 12:18:46
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