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死掉的洋葱

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】葡萄糖氧化酶酶活的测定方法 已有10人参与

我是第一次发帖,也没有金币可以贡献,不过希望大家帮帮忙,我用的是分光光度计来测定葡萄糖氧化酶的酶活,可是每次测定的值和实际值相差很多,大家看看还有没有其他的方法可以测定葡萄糖氧化酶的酶活!谢谢各位大侠了!
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死掉的洋葱

新虫 (初入文坛)

我使用的检验原理是:
葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成D-吡喃葡萄糖酸-1,5-内酯以及过氧化氢。就是利用反应生成的过氧化氢将还原性染料(邻联茴香氨)转化为氧化性染料,反应条件是25摄氏度,pH为7.0。
检测方法是:
将配置好的底物溶液(0.066mg/mL的邻联茴香氨溶液、10%葡萄糖溶液、过氧化氢溶液)放在25摄氏度水浴锅中平衡5分钟,然后加入稀释至0、2U/mL的葡萄糖氧化酶溶液,放入分光光度计中436nm下记录5min内吸光度值的郑家,根据线性曲线计算每分钟吸光度值的变化量(△E),根据公式:Volume activity(U/mL)=△E*3.72*稀释因子计算酶活
购买过来的葡萄糖氧化酶瓶身上有标记的酶活,然后我们将测得的酶活和标记的酶活做对比,计算百分比,但是每次我测得的百分比都要没有达到100%正负10%范围内,那说明我的酶活测定肯定有问题,酶蛋白是不需要测定的。
7楼2010-05-27 10:35:04
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赵丽娟

铁虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-29 21:31:02
你可以用滴定法试下,
2楼2010-05-26 11:09:13
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zhmy26

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
测定之前应该有一个标准曲线对吗?如果能够将标准曲线的R2值精确在99%以上,那么你就该相信你所做出来的结果。
3楼2010-05-26 15:45:27
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死掉的洋葱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 赵丽娟 at 2010-05-26 11:09:13:
你可以用滴定法试下,

谢谢啊!这个方法我会试试看的!
您知道用酶标仪可以测定葡萄糖氧化酶的酶活吗?具体方法有谁可以告知!
4楼2010-05-26 15:49:51
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