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追逐梦想

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】微生物基因敲除请进 已有6人参与

各位虫友:
      本人在做微生物的一个基因敲除,用的是温敏型载体发生同源双交换的方法来敲除,请问有没有需要注意的?还有有没有能提高同源重组概率的秘方!谢谢啊!
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追逐梦想!
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追逐梦想

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by huangqihong at 2010-05-19 08:38:55:
个人觉得同源臂的长度比较重要,如果在你研究的该微生物中有关于同源臂长度影响重组的报道,你可以关注一下,就是设计引物构建、敲除质粒时,必须保证重组所需的同源臂长度;另外转化效率和筛选的标记也很重要,尽 ...

不是很明白这跟转化效率有关吗?难道不是转化成功得到转化子后,就一直用这个转化子来做高温消除质粒吗?谢谢你啊
追逐梦想!
5楼2010-05-19 18:17:01
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

支持一下,本人也想做,关注
2楼2010-05-18 23:00:10
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huangqihong

铁虫 (小有名气)


scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-19 09:14:11
追逐梦想(金币+1):谢谢你啊 2010-05-19 18:14:53
个人觉得同源臂的长度比较重要,如果在你研究的该微生物中有关于同源臂长度影响重组的报道,你可以关注一下,就是设计引物构建、敲除质粒时,必须保证重组所需的同源臂长度;另外转化效率和筛选的标记也很重要,尽量选择效率比较高的方法。
4楼2010-05-19 08:38:55
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jgsghw

铜虫 (初入文坛)

追逐梦想(金币+1): 2010-05-21 14:46:22
看你用什么菌,可以用辅助质粒,例如大肠杆菌基因敲除的Red系统
6楼2010-05-19 18:19:20
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