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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】微生物基因敲除请进
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追逐梦想

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】微生物基因敲除请进 已有6人参与

各位虫友:
      本人在做微生物的一个基因敲除，用的是温敏型载体发生同源双交换的方法来敲除，请问有没有需要注意的？还有有没有能提高同源重组概率的秘方!谢谢啊！
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追逐梦想！
1楼 2010-05-18 22:02:54
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
支持一下，本人也想做，关注
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2楼2010-05-18 23:00:10
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鹏飞九万里

新虫 (初入文坛)
我也关注下吧~~~
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3楼2010-05-18 23:59:27
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huangqihong

铁虫 (小有名气)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-19 09:14:11
追逐梦想(金币+1):谢谢你啊 2010-05-19 18:14:53
个人觉得同源臂的长度比较重要，如果在你研究的该微生物中有关于同源臂长度影响重组的报道，你可以关注一下，就是设计引物构建、敲除质粒时，必须保证重组所需的同源臂长度；另外转化效率和筛选的标记也很重要，尽量选择效率比较高的方法。
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4楼2010-05-19 08:38:55
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追逐梦想

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by huangqihong at 2010-05-19 08:38:55:
个人觉得同源臂的长度比较重要，如果在你研究的该微生物中有关于同源臂长度影响重组的报道，你可以关注一下，就是设计引物构建、敲除质粒时，必须保证重组所需的同源臂长度；另外转化效率和筛选的标记也很重要，尽 ...

不是很明白这跟转化效率有关吗？难道不是转化成功得到转化子后，就一直用这个转化子来做高温消除质粒吗？谢谢你啊
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追逐梦想！
5楼2010-05-19 18:17:01
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jgsghw

铜虫 (初入文坛)
追逐梦想(金币+1): 2010-05-21 14:46:22
看你用什么菌，可以用辅助质粒，例如大肠杆菌基因敲除的Red系统
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6楼2010-05-19 18:19:20
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
追逐梦想(金币+1): 2010-05-21 14:46:05
一个很漫长的过程啊~
慢慢来，不要着急，我第一次做花了好几个月！
加油！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2010-05-19 19:37:06
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huangqihong

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 追逐梦想 at 2010-05-19 18:17:01:

  不是很明白这跟转化效率有关吗？难道不是转化成功得到转化子后，就一直用这个转化子来做高温消除质粒吗？谢谢你啊

你现在问题不是如何高效得到转化子吗，而不是得到转化子以后的事。我对你做高温消除质粒不是很懂，呵呵！
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8楼2010-05-20 07:30:21
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rong207787

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有人有pBAD-HisB的质粒吗？
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9楼2013-01-04 22:24:06
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