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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】镍拄纯化的问题
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匿名

用户注销 (正式写手)
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1楼 2010-05-17 11:24:06
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gaozx123

金虫 (小有名气)
★
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还可以吧，我一个师兄就曾经做过，看过他的结果，就目的条带。可能跟表达的蛋白有关吧。
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2楼2010-05-17 11:38:17
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biogefart

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
生物学没有绝对的结果，每个蛋白得自己摸条件
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闹太套
3楼2010-05-17 11:44:20
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wzgen1983

金虫 (正式写手)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):支持~~ 2010-05-17 15:29:50
很干净不现实，只能说，挂上去的主要都是目的蛋白，因为其他蛋白液可能会有非特异性吸附。过镍柱后，在电泳上只能看到单条带，也不能说明是纯的蛋白，因为电泳也有个检查限的。
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4楼2010-05-17 12:03:34
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2585165

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很干净基本上是做不到的。一般是用多种纯化方法结合。
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哎呀呀，别老说我丑，比起小时候，我这还真算是漂亮了！
5楼2010-05-17 12:09:47
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wulie0411

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-17 15:30:33
一般来将经过镍柱纯化就比较纯了，非特异性吸附可以通过低浓度的咪唑梯度洗下去，之后再用高浓度的咪唑把目的蛋白洗下来，经过优化的洗脱条件，电泳检测纯化结果应该是单条带的
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6楼2010-05-17 14:01:11
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biochem301

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
从分离效果来看，还是不错，虽然有不少非特异性结合，但是主要条带还是分离开了
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7楼2010-05-17 14:25:22
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-17 15:31:05
如果你选择少量高纯度，那你就用较高浓度咪唑Washing buffer，这样会纯一些。如果想保证较大的量，就不要期望很高的纯度。
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8楼2010-05-17 14:40:55
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wulie0411 at 2010-05-17 14:01:11:
一般来将经过镍柱纯化就比较纯了，非特异性吸附可以通过低浓度的咪唑梯度洗下去，之后再用高浓度的咪唑把目的蛋白洗下来，经过优化的洗脱条件，电泳检测纯化结果应该是单条带的

只用镍柱做到电泳单条带真的不容易，
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9楼2010-05-17 16:43:45
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lijunping68

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们为了保证蛋白纯度可能要多过几次镍柱
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10楼2010-05-19 23:20:00
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