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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR扩增怎么就没有条带！
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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增怎么就没有条带！ 已有17人参与

我想请问一下，我最近做PCR反应的时候怎么就没有目的基因片段产物？？？
是不是以下条件出问题了？

1）退火温度
2）引物浓度
3）模板浓度
4）dNTP浓度
5）Taq PlusI 聚合酶浓度
6）10X PCR buffer.

dNTP、Taq Plus聚合酶、10X PCR buffer 都是新的，剩下第一和第二的因素，
我想请问的是我一直P不出条带出来，是不是引物或者模板的问题？？
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1楼 2010-05-08 14:26:09
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keeperw

捐助贵宾 (小有名气)
★
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很有可能是引物的原因，最主要两条：3’端特异性要有保证；退火温度要一致
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2楼2010-05-08 14:51:14
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todouhy

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
再次检查一下自己的引物是否设计合理，各个组分的浓度！
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3楼2010-05-08 14:56:54
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
p不出来，一般就是引物问题，引物之前如果没有做过，那一般就是引物问题。但是模板也不容忽视，模板质量和浓度也要注意
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4楼2010-05-08 15:03:01
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mxb2008

木虫 (著名写手)

同样的问题

★
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我在做反转录，也是什么条带也没有。我昨晚总结了一下。可能主要原因是自己加的量不对，应仔细检查加的量和反应条件，希望多多交流。871193014。
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5楼2010-05-08 15:14:26
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miya173

银虫 (小有名气)
P不出来的原因太多了，这个需要深入讨论吧。同一条件下两次扩增有时候都可能不一样。PCR是门大学问啊
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6楼2010-05-08 15:20:55
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nnsulei

金虫 (正式写手)
逐个找原因咯
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努力做就有结果～
7楼2010-05-08 15:22:23
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wwllkkhh

金虫 (小有名气)
★
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我也遇到过这样的问题
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牛~逼~哄~哄
8楼2010-05-08 16:22:25
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caiyifan

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你热盖的温度设定好了吗？要105度哦
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I can and I will
9楼2010-05-08 16:41:28
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lingn

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是模板中目的基因的量太少了？是拿cDNA P的还是基因组？
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10楼2010-05-08 17:14:20
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