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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】哪位高人做过反转录？
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loveedward

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】哪位高人做过反转录？已有5人参与

现在需要从Candida中通过反转录克隆目的基因。而现在没有查到该基因的相关信息，只知道编码的目的蛋白的大小约为46KDa。想请教一下具体的实验过程。还望不吝赐教！
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1楼2010-05-05 20:14:25
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poog502

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-05 23:46:25
先找到其他与Candida相近的物种中克隆到的该基因的mRNA和氨基酸序列（越多越好），通过软件alignment的比对功能查找该基因的保守区（序列比对后颜色相同的区域，通常为黄色）。根据氨基酸序列的保守区找到mRNA序列的保守区，根据此保守区设计简并引物，进行同源克隆。
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2楼2010-05-05 20:24:18
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
Candida全基因已经测序了，从上面克隆个基因不是难事吧
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-05-05 20:29:56
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loveedward

银虫 (小有名气)
我做的是一种氧化还原酶，以前也比较过相似的底物的基因序列，但是发现这种酶的保守性很低，同一种底物的不同Candida中的酶的相似性都很低。所以想通过反转录用Olige dT进行非特异性扩增
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4楼2010-05-05 20:44:26
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lingn

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用Olige dT反转录出来的是全部的cDNA，回头做PCR的时候开始要回来设计引物。
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5楼2010-05-05 22:28:57
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意一楼的做法，首先确认同源物种的该基因信息。
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6楼2010-05-07 00:12:04
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