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zhmy26

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大量金币感谢,基因克隆表达。已有12人参与

我想在E.coli中表达一个外源基因,并且要这个基因表达出来具有酶活性,能够转化底物,合成新的产物。但是有一点不明白的就是:在克隆外源基因的时候,从ATG开始,到TAA结束?还是从更上游的位置开始到更下游的位置结束?这两者之间有什么区别呢?
第二个问题:如果在同一载体上克隆表达两个基因,这两个基因如何连接呢?是第一个基因的TAA直接续接第二个基因的ATG?还是中间需要添加一些片段?
各位大侠啊:我是在读的硕士研究生,要开展分子生物学的课题。由于导师在这方面不太精通,因此求助一个问题。

[ Last edited by zhmy26 on 2010-5-12 at 08:28 ]
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

zhmy26(金币+1): 2010-05-11 15:19:09
感觉楼上几位说的已经很好了,自己也罗嗦几句,我也刚开始基因的学习,第一个问题可以按照1楼的做法,不过似乎你是想一次性连接2个基因到一个载体上,我们实验室的一个师兄做的也是多基因连接,好像是直接连到一起的,至于双表达系统,可以学习一下,我感觉楼主现在似乎还不是很清楚自己的蛋白是连载一起的还是独立的,要是这样的话,可以用两个方法都试试,也可以自己再去查文献证实后再决定,反正就是一个从理论入手一个从实践做起,都可以解决。祝楼主好运~~
严于律己,宽以待人
10楼2010-05-11 09:21:02
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