24小时热门版块排行榜    

查看: 1350  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhmy26

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大量金币感谢,基因克隆表达。 已有12人参与

我想在E.coli中表达一个外源基因,并且要这个基因表达出来具有酶活性,能够转化底物,合成新的产物。但是有一点不明白的就是:在克隆外源基因的时候,从ATG开始,到TAA结束?还是从更上游的位置开始到更下游的位置结束?这两者之间有什么区别呢?
第二个问题:如果在同一载体上克隆表达两个基因,这两个基因如何连接呢?是第一个基因的TAA直接续接第二个基因的ATG?还是中间需要添加一些片段?
各位大侠啊:我是在读的硕士研究生,要开展分子生物学的课题。由于导师在这方面不太精通,因此求助一个问题。

[ Last edited by zhmy26 on 2010-5-12 at 08:28 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhmy26

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2010-05-05 09:34:30:
有很多载体可以选择,比如pet系列的。看你的要求,你可以使用非融合表达,即表达时不带标签,可以表达出天然的目的蛋白。一般表达载体都是载体具有启动子的,不需要自行添加,你只需将目的基因插入相应的酶切位点 ...

您所说的双终止子如何设计?是直接在ATG.......TAA中,把TAA换成双终止子,还是在TAA后面添加双终止子呢?
您外您所述的双表达系统可否给出几个名称?非常感谢。
8楼2010-05-11 08:26:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhmy26

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zhwenxing at 2010-05-11 09:22:42:
1、原核表达的话,注意包涵体问题。那没活性。

2、真核表达,注意表达标签等共表达,导致多余,后期的切除也是麻烦。

3、你做的这个原核表达,若插入两个基因,可以用linker将其连接,有独立的,有分开的。 ...

您所说的linker大概意思我懂,是一种专用的序列吗?
另外,如何才能够注意表达的可溶性和丰度呢?

不好意思,实在是水平太差。这些天看书看的头大。快要进实验室了,却机会一无所知。

[ Last edited by zhmy26 on 2010-5-11 at 15:21 ]
12楼2010-05-11 15:20:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhmy26 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见