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Yakamoz325银虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】关于使用AFLP的方法做遗传多样性的研究的几个问题 已有9人参与
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大家好，我是分子生物学菜鸟，以前没有做过相关的研究 我现在想做一种植物的遗传多样性，大约有10个样点，每个样点采样50个，这样算来也就是说共有500个样，如果用AFLP的方法来做，大约需要多少钱呢？ 此外，是不是有AFLP的试剂盒卖，用试剂盒是不是要比常规的AFLP方法贵很多呢？ 谢谢大家了。 盼大家指点。 小木虫上的朋友向来热情，希望今天的帖子有人回复啊！ 万分感谢！ |
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Yakamoz325(金币+10): 2010-04-28 18:21
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AFLP的实验我们做了4年，可以和你交流下经验。如果你是首次做AFLP，实验室基础决定你的预算。 1.仪器 建议用伯乐的产品。我们用的是：伯乐sequencing cell。一套配下来估计（30万），其中梳子和垫片很重要。 优点是：操作简便，特别是灌胶，制胶的过程。 2.相关试剂 首先玻璃板和托盘。一般准备100-200个就够了，注意规格。我们的是56×38的（cm）；固定、漂洗、染色、脱色用的托盘要按照你玻璃板的规格而定，操作方便，不能太小也不能太大，太小，不便操作；太大，摇床的功率是问题。估计总共（700元） 其次试剂，AFLP所用是试剂很多，要注意的是：尿素的质量；其他的药品Acr&Bis、M剥离硅烷、亲和硅烷、溴芬蓝和二甲苯氰FF、TEMED、硼酸、甲醛、冰醋酸、无水碳酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银均按照技术指导就可以用。（1500） 第三PCR，这个就是根据你的需要了。我们用的如下：Tris、EDTA、β-巯基乙醇、PVP、CTAB、水饱和酚、MseI、EcoRI、T4 DNA连接酶、MseI adapter、EcoRI adapter、琼脂糖、Taq聚合酶、dNTP 、 Marker；引物的数量，一般是16×16组合的。（4000） 以上说的就是从DNA提取到、酶切、连接、PCR、银染整个过程用的药品和具体的花费。如果实验室有的话能节约很多，如果没有就要买了。 建议：用一次的试剂就“借”；消耗品都是些化学试剂，便宜；DD水的质量和数量不可小看。 3实验设计 不知道LZ 是做什么的，我们做的是资源方面的所以工作量很大，引物数和样品数决定决定你的预算。500个样，一个引物组合理想的话要跑（不同规格47、73、96）8板。我们一般一人一天4个板，人力成本就少，如果你一个人做，会高。 可以这样说，AFLP一板的成本（含人工）80左右（前提是实验室基础好），实验过程长比较辛苦。 经验交流，拍砖勿狠。 |
9楼2010-04-28 10:44:23
Yakamoz325
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2楼2010-04-27 09:38:53
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4楼2010-04-27 19:54:44
