应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量pcr
121/2返回列表12下一页
查看: 2710  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】荧光定量pcr 已有5人参与

请问哪位能告知荧光定量PCR的时候做NTC的目的是什么？我的NTC怎么会总是污染呢？我的E=264%是怎么原因呢？怎么会这么大呢？谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-04-19 20:17:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
greatsaint(金币+1): 2010-04-19 21:14
greatsaint(金币+1):很好，谢谢 2010-04-19 21:15
amisking(金币+2): 2010-04-19 21:19
NTC和阴性对照不完全一样，拿病毒检测为例，阴性对照是指以非病毒感染样本为模板的PCR扩增，这个样本可以排除检测的不准确性，而NTC是指无模板对照，是防止操作、系统、药品等的污染，说明白这个道理，楼主应该知道做NTC的目的了吧。
我以前做病毒检测的定量PCR，发现NTC确实很容易污染，但现在做基因检测，基本不容易观测到污染现象了，这主要可能是由于质粒的气溶胶和水污染造成的，建议你PCR水常用常换，灭菌后分装，避免经常开瓶，而且要在超净台中制混合样，在超净台外加质粒、模板等
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-04-19 20:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatsaint

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-19 20:54:54:
NTC和阴性对照不完全一样，拿病毒检测为例，阴性对照是指以非病毒感染样本为模板的PCR扩增，这个样本可以排除检测的不准确性，而NTC是指无模板对照，是防止操作、系统、药品等的污染，说明白这个道理，楼主应该知 ...

请问，我的扩增效率达到了264%是什么原因呢？怎么会这么大呢？谢谢
赞一下 回复此楼
3楼2010-04-19 21:45:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

石头8832

铜虫 (小有名气)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-19 22:58
greatsaint(金币+1): 2010-04-20 08:58
你的目的基因可能是多拷贝的
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-04-19 22:02:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatsaint

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 石头8832 at 2010-04-19 22:02:26:
你的目的基因可能是多拷贝的

请问你这里说的多拷贝，或者单拷贝是什么意思呢？谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2010-04-20 08:59:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
greatsaint(金币+1): 2010-04-20 11:49
greatsaint(金币+1): 2010-04-27 10:07
NTC在普通PCR或定量PCR都是应该用的，为了就是避免环境和操作问题

但是定量出现假阳性除了这两个之外，还有考虑你的UNG酶是不是起作用了

扩增销量高也不能高到你这水平

所以肯定是有问题的

一可能是你的计算公式不对

二可能是你的加样操作有问题，导致的稀释不均

三就是你的阈值需要调整
赞一下 回复此楼
6楼2010-04-20 09:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sinoer

铜虫 (小有名气)
greatsaint(金币+1): 2010-04-27 10:07
你的扩增效率这么大，很明显是有非特异性扩增
建议从新设计引物
赞一下 回复此楼
7楼2010-04-23 16:52:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

henka

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
荧光定量有问题可以找toyobo。
赞一下 回复此楼
8楼2013-05-01 22:12:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
NTC，一为看操作是否过关，有没有污染，如果出现了目的基因的扩增（溶解曲线峰值同目的基因一致），则说明操作不过关，换试剂，耗材，实验室。避免操作污染
二看引物本生是否容易因二级结构导致扩增，如果出现溶解曲线峰值不同于目的基因的扩增，则该换引物了。当然这个不绝对，也可提高退火温度，减少循环数等控制，视改变条件后目的基因的扩增如何决定了。
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-02 11:13:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
扩增效率有的机器是按照正常值2计算的，有的是按照1计算的。你自己用标曲斜率计算一下，与理论值差多少。
赞一下 回复此楼
10楼2013-05-02 11:15:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 greatsaint 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +6 349506619 2026-08-28 6/300 2026-08-31 08:43 by kingkocxr
[基金申请] 能否申诉？ +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭