24小时热门版块排行榜    

查看: 2671  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】荧光定量pcr 已有5人参与

请问哪位能告知荧光定量PCR的时候做NTC的目的是什么?我的NTC怎么会总是污染呢?我的E=264%是怎么原因呢?怎么会这么大呢?谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
NTC,一为看操作是否过关,有没有污染,如果出现了目的基因的扩增(溶解曲线峰值同目的基因一致),则说明操作不过关,换试剂,耗材,实验室。避免操作污染
二看引物本生是否容易因二级结构导致扩增,如果出现溶解曲线峰值不同于目的基因的扩增,则该换引物了。当然这个不绝对,也可提高退火温度,减少循环数等控制,视改变条件后目的基因的扩增如何决定了。
9楼2013-05-02 11:13:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
greatsaint(金币+1): 2010-04-19 21:14
greatsaint(金币+1):很好,谢谢 2010-04-19 21:15
amisking(金币+2): 2010-04-19 21:19
NTC和阴性对照不完全一样,拿病毒检测为例,阴性对照是指以非病毒感染样本为模板的PCR扩增,这个样本可以排除检测的不准确性,而NTC是指无模板对照,是防止操作、系统、药品等的污染,说明白这个道理,楼主应该知道做NTC的目的了吧。
我以前做病毒检测的定量PCR,发现NTC确实很容易污染,但现在做基因检测,基本不容易观测到污染现象了,这主要可能是由于质粒的气溶胶和水污染造成的,建议你PCR水常用常换,灭菌后分装,避免经常开瓶,而且要在超净台中制混合样,在超净台外加质粒、模板等
2楼2010-04-19 20:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatsaint

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-19 20:54:54:
NTC和阴性对照不完全一样,拿病毒检测为例,阴性对照是指以非病毒感染样本为模板的PCR扩增,这个样本可以排除检测的不准确性,而NTC是指无模板对照,是防止操作、系统、药品等的污染,说明白这个道理,楼主应该知 ...

请问,我的扩增效率达到了264%是什么原因呢?怎么会这么大呢?谢谢
3楼2010-04-19 21:45:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

石头8832

铜虫 (小有名气)


scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-19 22:58
greatsaint(金币+1): 2010-04-20 08:58
你的目的基因可能是多拷贝的
4楼2010-04-19 22:02:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见