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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】克隆5k片段
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along8998

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】克隆5k片段 已有8人参与

各位大侠好，我要克隆一个5k左右的片段，GORK基因，现在犹豫不知道直接克隆还是分段克隆好，不知哪个大侠做过类似的长序列克隆，希望能给小弟一些指点和建议。
非常感谢！！
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呵呵
1楼 2010-04-16 18:27:04
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风中摇曳

木虫 (正式写手)

热爱科学
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-16 22:03
你可以用TAKARA公司的LA taq酶，它能扩增长片段，建议不要用普通的taq酶扩增。我最近刚通过LA taq酶得到一个4K左右的片段。
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scienceisnature
2楼2010-04-16 22:02:08
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zrm1983

银虫 (小有名气)
★ ★
lstt09nk(金币+2):欢迎交流~~ 2010-04-17 19:22
楼上的方法可以，takara的LAtaq酶挺好用的，我克隆过12K的片段，不过要注意选一个扩增长片段稳定的PCR仪，那样效果比较好。
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3楼2010-04-17 09:43:18
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
建议先分两段扩增，然后再做overlap PCR
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4楼2010-04-17 11:54:31
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
我最近用NEB公司 的Phusion超保真DNA聚合酶扩增长片段效果极佳，不妨一试。货号：F-530s。网址；www.neb-china.com
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5楼2010-04-26 12:28:22
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wdongdong

金虫 (小有名气)
用东洋纺的KOD-PLUS也是很好的酶，我克隆的是4kb很好用
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6楼2010-04-29 20:59:06
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gandalf886

银虫 (小有名气)
takara的LA taq还是算了吧，5kb估计满是突变，下游实验没法用。
KOD plus不错。takara的primer star也行
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7楼2010-04-29 21:06:05
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liyong1981

金虫 (正式写手)
建议分段做，一次做突变多，到时候更麻烦～
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8楼2010-04-30 10:11:11
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huaq1984

银虫 (初入文坛)
直接扩就好了，有Takara的LAtaq就可以，只要体系没问题应该好扩
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9楼2010-05-04 13:38:39
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yuanfeng

金虫 (小有名气)
可以用transgene的fast pfu， 专门用来扩增长片段的  保真效率很高  而且扩增效率很高 至少可以到达2kb/min吧   扩长片段我们实验室一般都是用这个。感觉还可以 ，但不知道对于你的实验合不合适
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10楼2010-05-04 13:55:51
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