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along8998

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】克隆5k片段已有8人参与

各位大侠好，我要克隆一个5k左右的片段，GORK基因，现在犹豫不知道直接克隆还是分段克隆好，不知哪个大侠做过类似的长序列克隆，希望能给小弟一些指点和建议。
非常感谢！！

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呵呵

1楼 2010-04-16 18:27:04

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liyong1981

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建议分段做，一次做突变多，到时候更麻烦～

8楼2010-04-30 10:11:11

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风中摇曳

木虫 (正式写手)

热爱科学

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★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-16 22:03

你可以用TAKARA公司的LA taq酶，它能扩增长片段，建议不要用普通的taq酶扩增。我最近刚通过LA taq酶得到一个4K左右的片段。

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scienceisnature

2楼2010-04-16 22:02:08

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zrm1983

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★ ★
lstt09nk(金币+2):欢迎交流~~ 2010-04-17 19:22

楼上的方法可以，takara的LAtaq酶挺好用的，我克隆过12K的片段，不过要注意选一个扩增长片段稳定的PCR仪，那样效果比较好。

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3楼2010-04-17 09:43:18

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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

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专业: 发育生物学

建议先分两段扩增，然后再做overlap PCR

4楼2010-04-17 11:54:31

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