| 查看: 1195 | 回复: 12 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
【求助/交流】双酶切连接问题
|
|||
|
大虾们，我最近用双酶切的方法对目的片段和质粒进行连接， 步骤是：先对两者进行双酶切，切胶回收，回收后电泳条带亮度差不多，位置正确，有点暗，但是肉眼可见，试了1：5，1：7，1：9，不同比例进行连接，化转后平板上都没有目的转化子，反而有杂菌菌落，很是郁闷，帮我分析下原因吧，先谢谢了哦 补充;我连接用的是宝生物的Soulution1,时间为20个小时左右 |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有91人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2009-12-06 16:21:58
3楼2009-12-06 16:48:23
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4738.3
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2308
- 在线: 740.7小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
4楼2009-12-06 17:02:21
5楼2009-12-06 17:39:00
tianpingpe
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 448.6
- 红花: 1
- 帖子: 111
- 在线: 43.1小时
- 虫号: 900044
- 注册: 2009-11-11
- 专业: 环境微生物学
★ ★ ★
漫迹(金币+1,VIP+0): 12-7 10:47
amisking(金币+2,VIP+0): 12-7 11:52
漫迹(金币+1,VIP+0): 12-7 10:47
amisking(金币+2,VIP+0): 12-7 11:52
| 你电泳后是用什么染色的呢，如果是eb的话，有可能会降低你连接效率，最好是无eb回收，有段时间我们也是连接转化有问题，后来发现是EB量太高，影响了连接效率，还有一点是sollution i连接效率本来就比较低，需要加入的buffer太多，里面的连接产物和载体太少，最好是用t4 连接酶。载体和片段的比例是摩尔比，不是质量比。再检查一下你的酶切位点，有的时候如果没有太注意位点，比较也许基因里面有个位点，但是没有发现，但是酶切的时候切掉了，但是比较小，电泳有的时候是看不出来的，再检查下你的酶切位点。感受态你最好转化个质粒，估计下转化率。 |
6楼2009-12-06 22:40:59
张晓梅ZXM
金虫 (正式写手)
meimeizhang
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 5321.6
- 散金: 22
- 红花: 2
- 帖子: 420
- 在线: 147.3小时
- 虫号: 848646
- 注册: 2009-09-15
- 性别: MM
- 专业: 微生物资源与分类学
7楼2009-12-07 10:39:21
8楼2009-12-07 10:54:49
changes
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 3143.5
- 散金: 103
- 红花: 3
- 帖子: 394
- 在线: 255.3小时
- 虫号: 142029
- 注册: 2005-12-21
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
9楼2009-12-07 11:48:09
10楼2009-12-07 20:25:42
