24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1171  |  回复: 12
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

漫迹

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】双酶切连接问题

大虾们,我最近用双酶切的方法对目的片段和质粒进行连接,
步骤是:先对两者进行双酶切,切胶回收,回收后电泳条带亮度差不多,位置正确,有点暗,但是肉眼可见,试了1:5,1:7,1:9,不同比例进行连接,化转后平板上都没有目的转化子,反而有杂菌菌落,很是郁闷,帮我分析下原因吧,先谢谢了哦
补充;我连接用的是宝生物的Soulution1,时间为20个小时左右
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changes

木虫 (正式写手)


漫迹(金币+1,VIP+0): 12-8 16:18
可能是载体没切好,分步酶切试试。沉淀回收也可。
9楼2009-12-07 11:48:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-6 17:04
漫迹(金币+1,VIP+0): 12-6 17:40
为何会有杂菌……最坏情况就是不长
电泳出来的条带明暗反映的是质量,而不是摩尔数
记得换算
是不是没有切动~~质粒好切,但是PCR产物的话,引物要设计好保护碱基,不然效率很低
2楼2009-12-06 16:21:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漫迹

金虫 (小有名气)

“为何会有杂菌……最坏情况就是不长
电泳出来的条带明暗反映的是质量,而不是摩尔数
记得换算
是不是没有切动~~质粒好切,但是PCR产物的话,引物要设计好保护碱基,不然     效率很低”

我酶切回收后电泳不是能看看浓度比么
目的片段P完我先连在T载体上了,也测序鉴定了,没有问题,酶切电泳后大小也是对的呢
3楼2009-12-06 16:48:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 12-6 17:05
漫迹(金币+1,VIP+0): 12-6 17:40
有杂菌菌落,没加抗生素,还是抗生素失效了,还是平板长的时间太长?
建议做个对照,转空载体,看看感受态是否有问题。
如果不是感受态的问题,问题就出在连接上了。
Thank-you,so-blue.
4楼2009-12-06 17:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 一志愿211,0703化学305分求调剂 +26 严西西戏 2026-04-06 33/1650 2026-04-11 23:01 by 314126402
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 296求调剂 +8 汪!?! 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:02 by 逆水乘风
[考研] 085410-273求调剂 +6 X1999 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:32 by Delta2012
[考研] 吉大计算机技术331分,英语六级,求调剂 +3 峰峰021116 2026-04-09 3/150 2026-04-10 20:01 by chemisry
[考研] 085404 298分求调剂 +10 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 11/550 2026-04-10 16:44 by wangy0907
[考研] 材料调剂 +5 hzhahg 2026-04-06 5/250 2026-04-10 10:10 by may_新宇
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH(等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 材料化工总分334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 20:19 by maddjdld
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 311求调剂 +6 surte 2026-04-08 13/650 2026-04-09 14:00 by surte
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 一志愿西南大学生物学学硕344 求生物学相关调剂/生物与医药 +7 超人不会飞@ 2026-04-08 7/350 2026-04-09 09:35 by gong120082
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-08 3/150 2026-04-08 22:00 by zhouyuwinner
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 一志愿哈工大,初试329,求环境科学与工程调剂! +11 余未辛 2026-04-06 11/550 2026-04-08 15:21 by screening
[考研] 生物医药调剂|SCI中科院三区一作+多项科研成果 +8 likangxing 2026-04-07 11/550 2026-04-08 00:02 by lys0704
[考研] 生物学363调剂求助 +7 fanzhang6666 2026-04-06 9/450 2026-04-07 17:37 by lijunpoly
[考研] 333求调剂 +6 合乘杨习夕 2026-04-06 6/300 2026-04-07 09:44 by 猪会飞
信息提示
请填处理意见