| 查看: 3196 | 回复: 11 | ||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||||
tanjunjun金虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助】关于MTT实验的问题请教 已有6人参与
|
|||||
| 本人合成了一种巯基化聚合物, 尝试测试其生物毒性,MTT时发现在板子上加入MTT后, 立即变紫，不知道是不是巯基和MTT反应，将MTT还原了？有没有什么方法改进？能否在反应前用PBS将高分子洗去再加MTT? |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 biomatter | Western Blot技术 | 壳聚糖A-Z |
» 猜你喜欢
考研292求调剂
已经有9人回复
-
安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂
已经有4人回复
-
生物力学与组织工程学论文润色/翻译怎么收费?
已经有80人回复
-
生物学308分求调剂（一志愿华东师大）
已经有1人回复
-
大连医科大学肿瘤干细胞研究院 招收生物化学与分子生物学专业硕士研究生
已经有0人回复
-
招考研调剂生
已经有0人回复
-
生物学308（一志愿华东师大）求调剂
已经有2人回复
-
中山大学孙逸仙纪念医院招收2026年考研调剂生
已经有0人回复
-
中山大学孙逸仙纪念医院招收2026年考研调剂生
已经有0人回复
-
中山大学孙逸仙纪念医院招收2026年考研调剂生
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教：如何选择抗肿瘤实验的给药剂量
已经有8人回复
- MTT法检测hegf生长因子活性系列问题求助
已经有22人回复
- 淋巴细胞增殖实验（MTT法）中的几个问题
已经有5人回复
- MTT法请教
已经有35人回复
- 求助mtt高手有关DMSO浓度影响的问题
已经有9人回复
- 请教MTT实验96孔板种板密度问题
已经有15人回复
- 【求助】为什么MTT试验只出现一次剂量依赖性结果？请教
已经有4人回复
- 【求助/交流】MTT法确定药物对细胞的作用浓度范围 结果如何分析
已经有21人回复
- 【求助/交流】特急！请教：MTT法要做阳性对照试验吗？如何做
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于MTT检测淋巴细胞活性的若干问题，请教各位大侠~~
已经有11人回复
weihgongbo
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 519.4
- 散金: 40
- 帖子: 317
- 在线: 91.1小时
- 虫号: 1134261
- 注册: 2010-10-28
- 性别: GG
- 专业: 口腔颌面组织生物力学和生
6楼2011-03-07 15:43:33
薰衣草儿
荣誉版主 (知名作家)
♡花语の恋♡
- 应助: 2 (幼儿园)
- 贵宾: 5.203
- 金币: 30230.2
- 散金: 9
- 红花: 47
- 沙发: 2
- 帖子: 8445
- 在线: 191.5小时
- 虫号: 772829
- 注册: 2009-05-17
- 性别: MM
- 专业: 药剂学
- 管辖: 生物材料
★ ★ ★
tanjunjun(金币+1):谢谢参与
zhangwj(金币+1,VIP+0):哈哈～ 11-17 01:21
yusen_1982(金币+1,VIP+0):好人，赞一个！！！ 11-17 07:02
tanjunjun(金币+1):谢谢参与
zhangwj(金币+1,VIP+0):哈哈～ 11-17 01:21
yusen_1982(金币+1,VIP+0):好人，赞一个！！！ 11-17 07:02
|
你可以用的聚合物和MTT放在一起试一下看是不是反应了~ 有反应的话，MTT最好别用了，因为你不可能洗涤很干净，会有误差的~ 测细胞活性有以下几种方法，如果都不适合，直接用流式细胞仪吧，没有问题的： 1.MTS 2.XTT比色法 3.3H-TdR掺入法 4.MTT法 MTS检测法 1．培养IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞或HT-2细胞（检测IL-2），或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞（检测IL-3）到对数生长期。 2．取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml含1×104～2×104上述细胞之一的DMEM培养液（加10％小牛血清）。 3．每孔加0.1ml系列稀释的待测细胞因子（IL-2或IL-3）样品或细胞因子标准品，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24小时。 4．每孔加20μl MTS/PMS混合液，继续培养3～4小时显色。 5．检测前摇晃培养板10秒钟，混匀颜色。在酶联检测仪上，波长570nm（或490nm，或570nm和690nm）处检测各孔的光吸收值（OD）。用样品稀释度对OD值（OD570、OD490或OD570/OD690）绘制剂量-反应曲线，根据标准品曲线计算样品中细胞因子的量。 XTT法： 用XTT代替MTT可省去溶解还原产物结晶的步骤，XTT可以被活细胞中的代谢酶还原成黄色水溶性的代谢产物（formazan）。代谢产物在OD450处有吸收峰。 MTT检测法 1．取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步） 2．用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子标准品，根据情况2～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品和待检样品，每个稀释度 3个重复孔。对照孔6个：3个阳性对照孔，每孔加0.1ml含大剂量细胞因子的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培养液。在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24～48小时或预定的时间。 3．吸去培养液，用PBS洗涤一次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前离心培养板）。 4．每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4～6小时。 5．每孔加0.1ml酸化异丙醇，也可用含10％ SDS的10mmol/L HCl代替酸化异丙醇，在振荡器上振荡混匀，让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长570nm，参考波长630nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。 3H]脱氧胸苷摄入法： 1．用RPMI-1640培养液洗涤对数生长期（培养3天）的CTLL-2细胞两次，每次250×g离心10分钟，洗去培养液中残存的IL-2。 2．用台盼蓝（1％ Trypan blue）染色法计数细胞并决定细胞的活力，用10％小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞至1×105/ml。 3．在96孔细胞培养板中每孔加0.1ml倍比稀释的标准IL-2或待测样品，每个稀释度三个复孔，标准IL-2从40 IU/ml稀释到0.019 IU/ml（8～10个稀释度），阴性对照孔不加IL-2。 4．每孔加0.1ml细胞悬液，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养18～24小时。每孔加10μl（0.5μCi或1.85×104Bq）[3H]脱氧胸苷，继续培养4小时。 5．用多头细胞收集器将细胞收集到玻璃纤维滤纸上，用3％醋酸水溶液滤纸3次，洗去游离的[3H]TdR。将滤纸置液体闪烁瓶中，加入5ml闪烁液。在液体闪烁仪上计数细胞摄入的同位素活性（每分钟放射性计数，cpm），根据仪器效率换算成dpm（每分钟衰变数）。 6．用dpm值对样品稀释倍数作图。在图上，标准IL-2的曲线与待测样品的曲线应当呈平行的S型，说明是同样的分子反应。比较同样dpm处的不同稀释倍数，决定待测样品的相应浓度。 |
2楼2009-11-16 20:38:28
jxybin
木虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 3275.9
- 散金: 11
- 红花: 1
- 帖子: 272
- 在线: 99.7小时
- 虫号: 707376
- 注册: 2009-02-24
- 性别: GG
- 专业: 生物材料
7楼2011-03-16 15:10:01
8楼2011-03-23 16:01:03
