| 查看: 877 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
求助！！关于平末端连接问题
|
|||
|
最近在做载体构建，有一个5k左右的片段要连接到一个12k左右的载体骨架上，两端都是平末端，始终连不上，不知道连接体系需要怎样的优化，连接酶要多，但是一个10ul的体系中，到底要加多少酶？？？以及目的片段和载体各是多少才合适？？？？没做过，身边的人也没有经验，做的非常辛苦啊~~~ 请各位高手指点指点啊！！！谢谢 ps: 载体已经去磷酸化 [ Last edited by xuxb_4156 on 2009-9-18 at 21:17 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
论文投稿，期刊推荐
已经有6人回复
-
寻求一种能扛住强氧化性腐蚀性的容器密封件
已经有3人回复
-
请问哪里可以有青B申请的本子可以借鉴一下。
已经有4人回复
-
真诚求助：手里的省社科项目结项要求主持人一篇中文核心，有什么渠道能发核心吗
已经有6人回复
-
孩子确诊有中度注意力缺陷
已经有14人回复
-
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢
已经有5人回复
-
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗
已经有5人回复
-
2025冷门绝学什么时候出结果
已经有3人回复
-
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入
已经有4人回复
-
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生
已经有6人回复
jessica533
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 385.2
- 散金: 17
- 帖子: 140
- 在线: 84.1小时
- 虫号: 830054
- 注册: 2009-08-18
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2009-09-18 19:15:27
charlies929
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 16308.8
- 散金: 50
- 红花: 11
- 帖子: 940
- 在线: 149.2小时
- 虫号: 465261
- 注册: 2007-11-22
- 性别: GG
- 专业: 环境化学
3楼2009-09-18 20:21:27
4楼2009-09-18 21:13:46
5楼2009-09-18 22:23:37
zhuifeng7000
至尊木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 15299
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 1794
- 在线: 87.4小时
- 虫号: 598143
- 注册: 2008-09-10
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2009-09-18 22:31:46
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
7楼2009-09-19 08:58:48
8楼2009-09-19 10:51:24
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
|
连接时要计算摩尔比，关键在于插入片段和载体的片段大小，比如说插入为0.5kb，20ng/ul，载体3.5kb，50ng/ul， 在都取1ul的情况下，插入和载体的摩尔比就是：1×3.5×20/（1×0.5×50）=2.8：1，通常使用的摩尔比为3：1(插入：载体)，2.8：1基本也就差不多了，并非一定要严格3：1，比如10ul体系粘性末端连接，1ul 3.5kb载体，1ul0.5kb插入，1ulT4 ligase， 1ul10×buffer,6ul H2O, 若是平端连接，酶量加倍，加1ul50%PEG4000，水适量减少即可 |
9楼2009-09-19 12:17:34
beisimai895
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4456.6
- 帖子: 231
- 在线: 191.5小时
- 虫号: 513938
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
10楼2009-09-19 16:21:27