| 查看: 910 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
求助！！关于平末端连接问题
|
|||
|
最近在做载体构建，有一个5k左右的片段要连接到一个12k左右的载体骨架上，两端都是平末端，始终连不上，不知道连接体系需要怎样的优化，连接酶要多，但是一个10ul的体系中，到底要加多少酶？？？以及目的片段和载体各是多少才合适？？？？没做过，身边的人也没有经验，做的非常辛苦啊~~~ 请各位高手指点指点啊！！！谢谢 ps: 载体已经去磷酸化 [ Last edited by xuxb_4156 on 2009-9-18 at 21:17 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
招博士
已经有5人回复
-
青椒八年已不青，大家都被折磨成啥样了？
已经有6人回复
-
救命帖
已经有9人回复
-
青年基金C终止
已经有3人回复
-
26申博求博导推荐-遥感图像处理方向
已经有4人回复
-
限项规定
已经有7人回复
-
西南交通大学国家级人才团队2026年博士研究生招生（考核制）—机械、材料、力学方向
已经有3人回复
-
英文综述是否需要润色及查重
已经有5人回复
-
为什么nbs上溴 没有产物点出现呢
已经有9人回复
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
|
连接时要计算摩尔比，关键在于插入片段和载体的片段大小，比如说插入为0.5kb，20ng/ul，载体3.5kb，50ng/ul， 在都取1ul的情况下，插入和载体的摩尔比就是：1×3.5×20/（1×0.5×50）=2.8：1，通常使用的摩尔比为3：1(插入：载体)，2.8：1基本也就差不多了，并非一定要严格3：1，比如10ul体系粘性末端连接，1ul 3.5kb载体，1ul0.5kb插入，1ulT4 ligase， 1ul10×buffer,6ul H2O, 若是平端连接，酶量加倍，加1ul50%PEG4000，水适量减少即可 |
9楼2009-09-19 12:17:34
jessica533
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 385.2
- 散金: 17
- 帖子: 140
- 在线: 84.1小时
- 虫号: 830054
- 注册: 2009-08-18
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2009-09-18 19:15:27
charlies929
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 16308.8
- 散金: 50
- 红花: 11
- 帖子: 940
- 在线: 149.2小时
- 虫号: 465261
- 注册: 2007-11-22
- 性别: GG
- 专业: 环境化学
3楼2009-09-18 20:21:27
5楼2009-09-18 22:23:37