24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 1000  |  回复: 9
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xuxb_4156

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助!!关于平末端连接问题

最近在做载体构建,有一个5k左右的片段要连接到一个12k左右的载体骨架上,两端都是平末端,始终连不上,不知道连接体系需要怎样的优化,连接酶要多,但是一个10ul的体系中,到底要加多少酶???以及目的片段和载体各是多少才合适????没做过,身边的人也没有经验,做的非常辛苦啊~~~
请各位高手指点指点啊!!!谢谢
ps: 载体已经去磷酸化

[ Last edited by xuxb_4156 on 2009-9-18 at 21:17 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beisimai895

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
载体与目的片段摩尔比为1:10,至于酶量,按酶的说明书操作就行,不需要太多,载体去磷后己没有羟基,你要保证你的目的片段有羟基才能连接,否则还要进行目的片段的磷酸化,不知道连接不成功是不是这个原因。
10楼2009-09-19 16:21:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

jessica533

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 9-18 22:33
平末端连接可以加1ul酶,另外建议通过在凝胶成像系统下对载体和插入片段定量,再根据载体和插入片段的分子量,计算出载体与插入片段的摩尔比为3:1时的体积比,载体和插入片段共8ul。
把忧愁微掉,将快乐积起。
2楼2009-09-18 19:15:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charlies929

至尊木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 9-18 22:33
我常常用Fermentas的酶做链接的,1ulT4, 1ul Buffer, 1ul PEG4000,剩下的两个片段摩尔比1:1,16度过夜转化Top10,应该没有问题的。
3楼2009-09-18 20:21:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuxb_4156

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by wangxiaoli8216 at 2009-9-18 21:13:
载体去磷酸化

已经去磷酸化了,连了几次都只有几个斑,而且不是重组子
5楼2009-09-18 22:23:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279求调剂 +11 张番茄不炒蛋 2026-04-11 11/550 2026-04-13 22:25 by zhq0425
[考研] 食品与营养(0955)271求调剂 +9 升格阿达 2026-04-12 9/450 2026-04-13 14:12 by maddjdld
[考研] 求调剂 +9 吃口冰激凌 2026-04-07 9/450 2026-04-13 08:46 by 紫曦紫棋
[考研] 322求调剂,08工科 +4 今天是个小号 2026-04-08 4/200 2026-04-13 00:20 by baobaoye
[考研] 296求调剂 +14 汪!?! 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 085500求调剂材料 +10 易11122 2026-04-09 10/500 2026-04-11 10:39 by maddjdld
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +4 加大号饭盒袋 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:52 by gong120082
[考研] 22408 366分,本科211,一志愿西工大 +4 Rubt 2026-04-09 4/200 2026-04-10 19:51 by chemisry
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 085404,334分,求调剂 +5 sunjie8888 2026-04-08 8/400 2026-04-09 07:26 by sunjie8888
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
[考研] 求考研材料调剂 +3 材化李可 2026-04-07 3/150 2026-04-08 00:21 by JourneyLucky
[考研] 259求调剂 +5 就爱吃土豆呀呀 2026-04-07 5/250 2026-04-07 22:40 by JourneyLucky
[考研] 机械调剂 +3 zzzbcb 2026-04-07 3/150 2026-04-07 22:19 by hemengdong
[考研] 331求调剂 +5 张元一 2026-04-07 6/300 2026-04-07 22:13 by hemengdong
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 09:25 by 小黑不怕难
信息提示
请填处理意见