应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 原核表达如何确定有表达
161/2返回列表12下一页
查看: 2237  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pc1453

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达如何确定有表达 已有3人参与

原核表达过程中已经测序正确了，预试验的胶图上预测蛋白大小处没有明显条带，这时该如何判断是否有表达呢，又该如何确定表达的位置以及实际的蛋白大小呢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-01-21 10:19:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

melyliang

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-21 22:46:11
有标签的话可以做个western

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2019-01-21 17:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1034714749

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-02-14 20:33:34
不表达也是可能的，遇到过很多次类似情况，大部分通过以下方式解决了，希望有所帮助。
1，是否注意基因来源，密码子是否优化过？
2，蛋白胶毕竟只是定性，建议做个western验证下
3，优化一下诱导条件，
4，换一个表达载体试试
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2019-01-23 10:21:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
那就是没有了

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2019-01-21 10:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2019-01-21 10:49:19
那就是没有了

测序也正确，确定带有目的基因的质粒也转化进去了，怎么会没有表达呢
赞一下 回复此楼
3楼2019-01-21 13:19:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jona_0814

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
pc1453(渊博震天代发): 金币+3, 鼓励积极回帖 2019-01-22 14:41:33
从你的描述看，应该是没有表达。
你可以调整一下诱导表达的条件。
另外，你在蛋白胶上点的样只是上清吗？有的蛋白可以不是可溶性表达。把全菌和上清一起跑个胶。对比多出来哪个条带。
蛋白大小一般都是根据氨基酸序列预测就可了。
赞一下 回复此楼
5楼2019-01-22 11:20:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Jona_0814 at 2019-01-22 11:20:43
从你的描述看，应该是没有表达。
你可以调整一下诱导表达的条件。
另外，你在蛋白胶上点的样只是上清吗？有的蛋白可以不是可溶性表达。把全菌和上清一起跑个胶。对比多出来哪个条带。
蛋白大小一般都是根据氨基酸 ...

蛋白胶上上的样包括了上清，破碎后的全蛋白，还有沉淀了，以及空载对照处理组也一起跑了，没有明显条带。
赞一下 回复此楼
6楼2019-01-23 08:49:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jona_0814

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-02-14 20:33:16
引用回帖:
6楼: Originally posted by pc1453 at 2019-01-23 08:49:01
蛋白胶上上的样包括了上清，破碎后的全蛋白，还有沉淀了，以及空载对照处理组也一起跑了，没有明显条带。...

有没有比空载多出来一条带呢？（你做对照了吗？）
如果没有的话，应该是蛋白没有被诱导表达出来。
调整一下诱导温度，诱导剂量登。你可以先小量诱导，摸索下条件。
赞一下 回复此楼
7楼2019-01-23 10:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Jona_0814 at 2019-01-23 10:06:15
有没有比空载多出来一条带呢？（你做对照了吗？）
如果没有的话，应该是蛋白没有被诱导表达出来。
调整一下诱导温度，诱导剂量登。你可以先小量诱导，摸索下条件。...

没有多出来一条带。
赞一下 回复此楼
9楼2019-01-23 10:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 1034714749 at 2019-01-23 10:21:31
不表达也是可能的，遇到过很多次类似情况，大部分通过以下方式解决了，希望有所帮助。
1，是否注意基因来源，密码子是否优化过？
2，蛋白胶毕竟只是定性，建议做个western验证下
3，优化一下诱导条件，
4，换一 ...

这是新换的载体，诱导条件是用之前的条件，还有必要再试一次吗
赞一下 回复此楼
10楼2019-01-23 10:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pc1453 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:47 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:46 by vs90ilomwc
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 5/250 2026-02-08 08:32 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:27 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +5 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:12 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:07 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 08:06 by vs90ilomwc
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 07:46 by vs90ilomwc
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:32 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:27 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:26 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:07 by vs90ilomwc
[教师之家] 有院领导为了换新车，用横向课题经费买了俩车 +7 瞬息宇宙 2026-02-04 7/350 2026-02-07 21:47 by tfang
[有机交流] 酰胺脱乙酰基 10+5 chibby 2026-02-03 12/600 2026-02-07 19:29 by 江东闲人
[基金申请] 同年申请2项不同项目，第1个项目里不写第2个项目的信息，可以吗 +4 hitsdu 2026-02-06 4/200 2026-02-07 13:07 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候真觉得大城市人没有县城人甚至个体户幸福 +9 苏东坡二世 2026-02-04 10/500 2026-02-07 12:37 by 小毛球
[考博] 天津大学招2026.09的博士生，欢迎大家推荐交流（博导是本人） +4 a793625982 2026-02-05 5/250 2026-02-07 10:57 by a793625982
[公派出国] CSC & MSCA 博洛尼亚大学能源材料课题组博士/博士后招生｜MSCA经费充足、排名优 +4 雨念 2026-02-01 6/300 2026-02-06 23:32 by MelissaPon
[基金申请] 面上项目申报 +3 Tide man 2026-02-01 3/150 2026-02-05 22:56 by god_tian
[教师之家] 遇见不省心的家人很难过 +18 otani 2026-02-03 22/1100 2026-02-04 11:06 by tangmnt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭