应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 原核表达如何确定有表达
161/2返回列表12下一页
查看: 2273  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pc1453

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达如何确定有表达 已有3人参与

原核表达过程中已经测序正确了，预试验的胶图上预测蛋白大小处没有明显条带，这时该如何判断是否有表达呢，又该如何确定表达的位置以及实际的蛋白大小呢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-01-21 10:19:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

melyliang

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-21 22:46:11
有标签的话可以做个western

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2019-01-21 17:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1034714749

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-02-14 20:33:34
不表达也是可能的，遇到过很多次类似情况，大部分通过以下方式解决了，希望有所帮助。
1，是否注意基因来源，密码子是否优化过？
2，蛋白胶毕竟只是定性，建议做个western验证下
3，优化一下诱导条件，
4，换一个表达载体试试
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2019-01-23 10:21:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
那就是没有了

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2019-01-21 10:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2019-01-21 10:49:19
那就是没有了

测序也正确，确定带有目的基因的质粒也转化进去了，怎么会没有表达呢
赞一下 回复此楼
3楼2019-01-21 13:19:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jona_0814

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
pc1453(渊博震天代发): 金币+3, 鼓励积极回帖 2019-01-22 14:41:33
从你的描述看，应该是没有表达。
你可以调整一下诱导表达的条件。
另外，你在蛋白胶上点的样只是上清吗？有的蛋白可以不是可溶性表达。把全菌和上清一起跑个胶。对比多出来哪个条带。
蛋白大小一般都是根据氨基酸序列预测就可了。
赞一下 回复此楼
5楼2019-01-22 11:20:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Jona_0814 at 2019-01-22 11:20:43
从你的描述看，应该是没有表达。
你可以调整一下诱导表达的条件。
另外，你在蛋白胶上点的样只是上清吗？有的蛋白可以不是可溶性表达。把全菌和上清一起跑个胶。对比多出来哪个条带。
蛋白大小一般都是根据氨基酸 ...

蛋白胶上上的样包括了上清，破碎后的全蛋白，还有沉淀了，以及空载对照处理组也一起跑了，没有明显条带。
赞一下 回复此楼
6楼2019-01-23 08:49:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jona_0814

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-02-14 20:33:16
引用回帖:
6楼: Originally posted by pc1453 at 2019-01-23 08:49:01
蛋白胶上上的样包括了上清，破碎后的全蛋白，还有沉淀了，以及空载对照处理组也一起跑了，没有明显条带。...

有没有比空载多出来一条带呢？（你做对照了吗？）
如果没有的话，应该是蛋白没有被诱导表达出来。
调整一下诱导温度，诱导剂量登。你可以先小量诱导，摸索下条件。
赞一下 回复此楼
7楼2019-01-23 10:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Jona_0814 at 2019-01-23 10:06:15
有没有比空载多出来一条带呢？（你做对照了吗？）
如果没有的话，应该是蛋白没有被诱导表达出来。
调整一下诱导温度，诱导剂量登。你可以先小量诱导，摸索下条件。...

没有多出来一条带。
赞一下 回复此楼
9楼2019-01-23 10:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 1034714749 at 2019-01-23 10:21:31
不表达也是可能的，遇到过很多次类似情况，大部分通过以下方式解决了，希望有所帮助。
1，是否注意基因来源，密码子是否优化过？
2，蛋白胶毕竟只是定性，建议做个western验证下
3，优化一下诱导条件，
4，换一 ...

这是新换的载体，诱导条件是用之前的条件，还有必要再试一次吗
赞一下 回复此楼
10楼2019-01-23 10:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pc1453 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 没有青基直接申请面上，感觉自己疯了 +3 kevin63t 2026-03-02 4/200 2026-03-03 11:10 by celinswift
[考研] 283求调剂 +7 鹿沫笙 2026-03-02 7/350 2026-03-03 10:01 by 乐学xi
[考研] 307求调剂 +6 wyyyqx 2026-03-01 6/300 2026-03-03 09:24 by 2235787770
[考研] 清华大学 材料与化工 353分求调剂 +5 awaystay 2026-03-02 6/300 2026-03-03 09:03 by houyaoxu
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +11 YXCT 2026-03-01 13/650 2026-03-02 21:38 by sunny81
[考研] 085600求调剂 +4 LRZZZZZZ 2026-03-02 5/250 2026-03-02 20:33 by 云旗yunqi
[考研] 0856材料调剂 +5 沿岸有贝壳OUC 2026-03-02 5/250 2026-03-02 20:31 by hypershenger
[考研] 302材料工程求调剂 +5 Doleres 2026-03-01 6/300 2026-03-02 19:53 by 张晓芳0105
[考研] 275求调剂 +7 明远求学 2026-03-01 7/350 2026-03-02 19:22 by zhukairuo
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 5/250 2026-03-02 19:19 by 轻松不少随
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +6 pin8023 2026-02-28 8/400 2026-03-02 17:13 by 0854蹲调剂
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +6 ieewxg 2026-02-25 7/350 2026-03-02 12:44 by stidwellNK
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-02 4/200 2026-03-02 10:16 by 13853210211
[考研] 材料类求调剂 +11 wana_kiko 2026-02-28 14/700 2026-03-02 08:46 by 聪明的大松鼠
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭