应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 原核表达如何确定有表达
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
161/2返回列表12下一页
查看: 2377  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pc1453

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 原核表达如何确定有表达 已有3人参与

原核表达过程中已经测序正确了，预试验的胶图上预测蛋白大小处没有明显条带，这时该如何判断是否有表达呢，又该如何确定表达的位置以及实际的蛋白大小呢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-01-21 10:19:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

melyliang

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-21 22:46:11
有标签的话可以做个western

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2019-01-21 17:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1034714749

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-02-14 20:33:34
不表达也是可能的，遇到过很多次类似情况，大部分通过以下方式解决了，希望有所帮助。
1，是否注意基因来源，密码子是否优化过？
2，蛋白胶毕竟只是定性，建议做个western验证下
3，优化一下诱导条件，
4，换一个表达载体试试
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2019-01-23 10:21:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

wuhu0612331

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
那就是没有了

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2019-01-21 10:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2019-01-21 10:49:19
那就是没有了

测序也正确，确定带有目的基因的质粒也转化进去了，怎么会没有表达呢
赞一下 回复此楼
3楼2019-01-21 13:19:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jona_0814

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
pc1453(渊博震天代发): 金币+3, 鼓励积极回帖 2019-01-22 14:41:33
从你的描述看，应该是没有表达。
你可以调整一下诱导表达的条件。
另外，你在蛋白胶上点的样只是上清吗？有的蛋白可以不是可溶性表达。把全菌和上清一起跑个胶。对比多出来哪个条带。
蛋白大小一般都是根据氨基酸序列预测就可了。
赞一下 回复此楼
5楼2019-01-22 11:20:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
5楼: Originally posted by Jona_0814 at 2019-01-22 11:20:43
从你的描述看，应该是没有表达。
你可以调整一下诱导表达的条件。
另外，你在蛋白胶上点的样只是上清吗？有的蛋白可以不是可溶性表达。把全菌和上清一起跑个胶。对比多出来哪个条带。
蛋白大小一般都是根据氨基酸 ...

蛋白胶上上的样包括了上清，破碎后的全蛋白，还有沉淀了，以及空载对照处理组也一起跑了，没有明显条带。
赞一下 回复此楼
6楼2019-01-23 08:49:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jona_0814

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-02-14 20:33:16
引用回帖:
6楼: Originally posted by pc1453 at 2019-01-23 08:49:01
蛋白胶上上的样包括了上清，破碎后的全蛋白，还有沉淀了，以及空载对照处理组也一起跑了，没有明显条带。...

有没有比空载多出来一条带呢？（你做对照了吗？）
如果没有的话，应该是蛋白没有被诱导表达出来。
调整一下诱导温度，诱导剂量登。你可以先小量诱导，摸索下条件。
赞一下 回复此楼
7楼2019-01-23 10:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
7楼: Originally posted by Jona_0814 at 2019-01-23 10:06:15
有没有比空载多出来一条带呢？（你做对照了吗？）
如果没有的话，应该是蛋白没有被诱导表达出来。
调整一下诱导温度，诱导剂量登。你可以先小量诱导，摸索下条件。...

没有多出来一条带。
赞一下 回复此楼
9楼2019-01-23 10:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pc1453

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
8楼: Originally posted by 1034714749 at 2019-01-23 10:21:31
不表达也是可能的，遇到过很多次类似情况，大部分通过以下方式解决了，希望有所帮助。
1，是否注意基因来源，密码子是否优化过？
2，蛋白胶毕竟只是定性，建议做个western验证下
3，优化一下诱导条件，
4，换一 ...

这是新换的载体，诱导条件是用之前的条件，还有必要再试一次吗
赞一下 回复此楼
10楼2019-01-23 10:50:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pc1453 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂：085600材料与化工，考材科基，总分319 +17 678lucky 2026-03-31 21/1050 2026-04-01 01:40 by 1018329917
[考研] 材料专硕306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-31 3/150 2026-04-01 00:39 by fmesaito
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-31 5/250 2026-03-31 23:08 by liu823948201
[考研] 08工科275分求调剂 +6 AaAa7420 2026-03-31 6/300 2026-03-31 21:27 by XBbbb13
[考研] 070300化学279求调剂 +9 哈哈哈^_^ 2026-03-31 11/550 2026-03-31 20:32 by sophie2180
[考研] 求调剂，一志愿北林食品与营养095500，301分，已过六级，有科研经历 +3 快乐储蓄罐 2026-03-31 3/150 2026-03-31 20:20 by plum
[考研] 一志愿北京科技大学材料学硕328分求调剂 +4 1段时间 2026-03-31 5/250 2026-03-31 19:56 by wxiongid
[考研] 化学308分调剂 +11 你好明天你好 2026-03-30 12/600 2026-03-31 19:14 by 杨金金金
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-29 6/300 2026-03-31 16:35 by hypershenger
[考研] 土木304求调剂 +3 顶级擦擦 2026-03-31 3/150 2026-03-31 13:59 by 西京学院招办
[考研] 0703化学 +20 妮妮ninicgb 2026-03-27 20/1000 2026-03-31 13:33 by 无际的草原
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
[考研] 哈尔滨工业大学材料与化工专硕378求调剂 +3 塔比乌斯 2026-03-30 3/150 2026-03-30 22:55 by 无际的草原
[考研] 085601材料工程找调剂 +17 oatmealR 2026-03-29 18/900 2026-03-30 19:21 by Wang200018
[考研] 296求调剂 +10 彼岸t 2026-03-29 10/500 2026-03-30 10:50 by 探123
[考研] 085404求调剂，总分309，本科经历较为丰富 +6 来财aa 2026-03-25 6/300 2026-03-30 09:48 by 青海小西牛
[考研] 2026年华南师范大学欢迎化学，化工，生物，生医工等专业优秀学子加入！ +3 llss0711 2026-03-28 6/300 2026-03-29 10:26 by llss0711
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭