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pc1453

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达如何确定有表达 已有3人参与

原核表达过程中已经测序正确了,预试验的胶图上预测蛋白大小处没有明显条带,这时该如何判断是否有表达呢,又该如何确定表达的位置以及实际的蛋白大小呢
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1034714749

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-02-14 20:33:34
不表达也是可能的,遇到过很多次类似情况,大部分通过以下方式解决了,希望有所帮助。
1,是否注意基因来源,密码子是否优化过?
2,蛋白胶毕竟只是定性,建议做个western验证下
3,优化一下诱导条件,
4,换一个表达载体试试
8楼2019-01-23 10:21:31
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查看全部 16 个回答

wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

2楼2019-01-21 10:49:19
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pc1453

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2019-01-21 10:49:19
那就是没有了

测序也正确,确定带有目的基因的质粒也转化进去了,怎么会没有表达呢
3楼2019-01-21 13:19:33
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melyliang

新虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-21 22:46:11
有标签的话可以做个western

发自小木虫Android客户端
4楼2019-01-21 17:01:21
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