| 查看: 2000 | 回复: 38 | ||
林小露铜虫 (小有名气)
|
[求助]
设计引物遇到难题 已有3人参与
|
|
|
本人扩增的序列为946bp，21-608为CDS，以下为基因序列； 1 agaagaaccc gacaccagaa atggagaaga aattgtttgg tatcgcttta ctcttaacta 61 ctgtagcctc agttttggcc gccgatacaa acgccccaat atgtctttgt gacgagccag 121 gagttctagg acggactcag atcgtgacga cggagattaa agataagatc gagaaagctg 181 tcgaagctgt tgcacaagag agtggtgtat caggaagagg attttctata ttttctcatc 241 atcctgtgtt cagggaatgt ggcaaatacg agtgtcgaac cgtgaggcct gaacacagcc 301 gttgctataa ctttcccccg tttattcatt tcaagtcaga atgccctgtt tcaactcgag 361 actgtgagcc agtatttggt tatacggtag caggagagtt tagggttatt gtacaggctc 421 caagggctgg gtttagacag tgtgtgtggc aacataagtg tcgattcggt agtaacagct 481 gtggttataa tgggaggtgt actcagcaga ggtcagtggt tcgtttggtg acctacaact 541 tggagaaaga cggtttcttg tgtgaaagct tccgaacatg ctgtggttgt ccttgtcgta 601 gtttttaagc ctaactcatg ggttttagtt cttaagtcta actcattaag actaaattgt 661 taagccaaac tcatgagttt agacacaagg attattcagt actatctttg caaatattac 721 tttttgattg ttagtttcga caaattaacg atgcttgttc aaattttaaa accttctaaa 781 ctacagaact aacattcagt aaaatataat ttgatttcgt aattacaata agaacgtaac 841 atgtattgtt atcaccttct ccatccaatc attttttata ctctgtatga ataaaatact 901 gtatggaatg tactttgtac aataaagtta aatatatatc tatgcc 用pp5设计引物，设计条件上游引物在1-20bp内，下游引物在609-946bp内。引物长度在18-21内均试过，得到的上下游引物Tm值相差非常大，上下游引物的GC含量相差也很大，条件很不好，不懂的应该怎么改条件，按照网上的说法改了条件还是不好，求大神赐教！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有270人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 点突变遇到的难题？
已经有2人回复
- 这样一段基因该如何调取，请指教，谢谢
已经有3人回复
- 紧！急！如何确定目的片段的长度
已经有4人回复
- 【求助/交流】荧光定量PCR
已经有6人回复
29楼2017-10-15 15:09:56
mlxmiao
木虫 (著名写手)
- 应助: 46 (小学生)
- 金币: 7174.3
- 散金: 4871
- 红花: 15
- 帖子: 2883
- 在线: 311.8小时
- 虫号: 127413
- 注册: 2005-12-08
- 专业: 园艺学与植物营养学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
随便帮你选了一段序列，具体可以参照NCBI上的在线软件 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/too ... enH61LOZlpB7Ldr8Dyg  大.png |
14楼2017-10-13 12:03:53
didongwei
金虫 (著名写手)
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 6350.7
- 散金: 25
- 红花: 14
- 帖子: 1048
- 在线: 78.4小时
- 虫号: 1909384
- 注册: 2012-07-25
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
17楼2017-10-13 19:01:42
didongwei
金虫 (著名写手)
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 6350.7
- 散金: 25
- 红花: 14
- 帖子: 1048
- 在线: 78.4小时
- 虫号: 1909384
- 注册: 2012-07-25
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
【答案】应助回帖
|
如果用酶切法做，还要加酶切位点和保护碱基，设计好后单条引物长度不要大于35bp就行，设计这种载体引物不用考虑那么多，设计出来试就可以了。另外载体引物一般不会像你说的在两侧设计…… 发自小木虫IOS客户端 |
23楼2017-10-13 22:25:25
didongwei
金虫 (著名写手)
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 6350.7
- 散金: 25
- 红花: 14
- 帖子: 1048
- 在线: 78.4小时
- 虫号: 1909384
- 注册: 2012-07-25
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
【答案】应助回帖
|
这个要试，一般先以低的那个作参考，在其基础上降低1到2度，然后扩增，如果没有杂带就可以，如果有杂带就逐渐提高温度，直至没有杂带为止，如果温度调到扩增不出来，也还是没有合适温度就更换引物，主要是换酶切位点，或者保护碱基换成G或C 发自小木虫IOS客户端 |
28楼2017-10-14 22:55:32
didongwei
金虫 (著名写手)
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 6350.7
- 散金: 25
- 红花: 14
- 帖子: 1048
- 在线: 78.4小时
- 虫号: 1909384
- 注册: 2012-07-25
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
32楼2017-10-16 00:20:01
2楼2017-10-12 17:26:21
林小露
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1157.6
- 帖子: 118
- 在线: 16.8小时
- 虫号: 5239513
- 注册: 2016-11-15
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2017-10-12 20:04:20
晋鹏
版主 (知名作家)
- MolEPI: 6
- 应助: 626 (博士)
- 贵宾: 0.096
- 金币: 27590.2
- 散金: 1052
- 红花: 288
- 沙发: 2
- 帖子: 5663
- 在线: 726.4小时
- 虫号: 1183978
- 注册: 2011-01-05
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
- 管辖: 农林
4楼2017-10-12 20:49:15
5楼2017-10-12 22:18:15
6楼2017-10-12 22:39:57
didongwei
金虫 (著名写手)
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 6350.7
- 散金: 25
- 红花: 14
- 帖子: 1048
- 在线: 78.4小时
- 虫号: 1909384
- 注册: 2012-07-25
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
7楼2017-10-12 23:12:58
林小露
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1157.6
- 帖子: 118
- 在线: 16.8小时
- 虫号: 5239513
- 注册: 2016-11-15
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
8楼2017-10-13 09:28:43
林小露
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1157.6
- 帖子: 118
- 在线: 16.8小时
- 虫号: 5239513
- 注册: 2016-11-15
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
9楼2017-10-13 09:30:46
林小露
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1157.6
- 帖子: 118
- 在线: 16.8小时
- 虫号: 5239513
- 注册: 2016-11-15
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
10楼2017-10-13 09:31:47