应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 设计引物遇到难题
394/4返回列表上一页1234
查看: 1998  |  回复: 38
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

林小露

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
29楼: Originally posted by 育种小飞 at 2017-10-15 15:09:56
扩基因全长，分两种情况，如果是从质粒中扩，引物直接取起始密码子和终止密码子，如果从cDNA中扩，那就必须在utr区设计引物，

从质粒开始扩是什么意思？本人新手，不是很懂啊，我的目的是想克隆一个动物蛋白的基因，提取mRNA反转得到CDNA为模版，再进行PCR扩增，表达蛋白，请大神指教！

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
31楼2017-10-15 21:11:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
30楼: Originally posted by 林小露 at 2017-10-15 21:08:57
我的原模版是提取mRNA反转得到的CDNA，也可以用这个方法的是吗？
...

这个可以的……先以最低Tm为基础减1到2度试，有非特异扩增就继续加温度。

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
不是优秀，而是不可替代
32楼2017-10-16 00:20:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林小露

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
32楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-16 00:20:01
这个可以的……先以最低Tm为基础减1到2度试，有非特异扩增就继续加温度。
...

那设计好的引物的Tm值，是不是包括酶切位点，保护碱基和起始密码子开始20个在内一起的Tm值，还是说只是起始密码子20个碱基序列的Tm值呢？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
33楼2017-10-16 22:11:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
33楼: Originally posted by 林小露 at 2017-10-16 22:11:46
那设计好的引物的Tm值，是不是包括酶切位点，保护碱基和起始密码子开始20个在内一起的Tm值，还是说只是起始密码子20个碱基序列的Tm值呢？
...

这个你不用算，引物单子上会有准确的温度的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
不是优秀，而是不可替代
34楼2017-10-16 22:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林小露

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
34楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-16 22:22:33
这个你不用算，引物单子上会有准确的温度的
...

非常感谢您！！！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
35楼2017-10-17 14:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shaozi1030
36楼2017-10-18 14:45:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cifer1230

金虫 (著名写手)

cifer1230
引用回帖:
28楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-14 22:55:32
这个要试，一般先以低的那个作参考，在其基础上降低1到2度，然后扩增，如果没有杂带就可以，如果有杂带就逐渐提高温度，直至没有杂带为止，如果温度调到扩增不出来，也还是没有合适温度就更换引物，主要是换酶切位 ...

你好，我想问您个问题，我p的那个基因，原来55度什么带都没，53度发现有二聚体，51度也是只有二聚体，52度也是只有二聚体，我应该怎么调呢？
赞一下 回复此楼
.....
37楼2017-10-18 17:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡卡罗特zxg

金虫 (小有名气)
能扩增出来了就可以  然后胶回收纯化   引物设计没关系的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
38楼2017-10-18 18:20:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
37楼: Originally posted by cifer1230 at 2017-10-18 17:42:10
你好，我想问您个问题，我p的那个基因，原来55度什么带都没，53度发现有二聚体，51度也是只有二聚体，52度也是只有二聚体，我应该怎么调呢？...

如果确定模板没有问题的条件下，用54度试试，另外你用的是高保真酶吗？高保真酶对模板要求比较高

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
不是优秀，而是不可替代
39楼2017-10-18 21:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 林小露 的主题更新
394/4返回列表上一页1234
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭