24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2096  |  回复: 38
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

林小露

铜虫 (小有名气)

[求助] 设计引物遇到难题 已有3人参与

本人扩增的序列为946bp,21-608为CDS,以下为基因序列;

        1 agaagaaccc gacaccagaa atggagaaga aattgtttgg tatcgcttta ctcttaacta

       61 ctgtagcctc agttttggcc gccgatacaa acgccccaat atgtctttgt gacgagccag

      121 gagttctagg acggactcag atcgtgacga cggagattaa agataagatc gagaaagctg

      181 tcgaagctgt tgcacaagag agtggtgtat caggaagagg attttctata ttttctcatc

      241 atcctgtgtt cagggaatgt ggcaaatacg agtgtcgaac cgtgaggcct gaacacagcc

      301 gttgctataa ctttcccccg tttattcatt tcaagtcaga atgccctgtt tcaactcgag

      361 actgtgagcc agtatttggt tatacggtag caggagagtt tagggttatt gtacaggctc

      421 caagggctgg gtttagacag tgtgtgtggc aacataagtg tcgattcggt agtaacagct

      481 gtggttataa tgggaggtgt actcagcaga ggtcagtggt tcgtttggtg acctacaact

      541 tggagaaaga cggtttcttg tgtgaaagct tccgaacatg ctgtggttgt ccttgtcgta

      601 gtttttaagc ctaactcatg ggttttagtt cttaagtcta actcattaag actaaattgt

      661 taagccaaac tcatgagttt agacacaagg attattcagt actatctttg caaatattac

      721 tttttgattg ttagtttcga caaattaacg atgcttgttc aaattttaaa accttctaaa

      781 ctacagaact aacattcagt aaaatataat ttgatttcgt aattacaata agaacgtaac

      841 atgtattgtt atcaccttct ccatccaatc attttttata ctctgtatga ataaaatact

      901 gtatggaatg tactttgtac aataaagtta aatatatatc tatgcc

用pp5设计引物,设计条件上游引物在1-20bp内,下游引物在609-946bp内。引物长度在18-21内均试过,得到的上下游引物Tm值相差非常大,上下游引物的GC含量相差也很大,条件很不好,不懂的应该怎么改条件,按照网上的说法改了条件还是不好,求大神赐教!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

林小露

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
32楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-16 00:20:01
这个可以的……先以最低Tm为基础减1到2度试,有非特异扩增就继续加温度。
...

那设计好的引物的Tm值,是不是包括酶切位点,保护碱基和起始密码子开始20个在内一起的Tm值,还是说只是起始密码子20个碱基序列的Tm值呢?

发自小木虫IOS客户端
33楼2017-10-16 22:11:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 39 个回答

匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见
2楼2017-10-12 17:26:21
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

林小露

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kentyu at 2017-10-12 17:26:21
可以长一点,保证两条引物的TM值相差在5度以内

谢谢您的回复啊。本人是新手,这个一整段基因序列长度就是946bp,我是想扩增出来表达蛋白质的。请问如何长一点呢?不懂
3楼2017-10-12 20:04:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-10-13 07:49:10
如果已经有CDS。
为什么还需要引物呢?

直接P全长就好了。
及时行乐,人生不留遗憾!
4楼2017-10-12 20:49:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +5 小卡不卡. 2026-03-29 5/250 2026-03-30 19:30 by Wang200018
[考研] 调剂 +3 GK72 2026-03-30 3/150 2026-03-30 18:31 by 啊李999
[考研] 化学308分调剂 +7 你好明天你好 2026-03-30 8/400 2026-03-30 13:02 by 你好明天你好
[考研] 281求调剂 +4 亚克西good 2026-03-26 6/300 2026-03-29 21:06 by 啊李999
[考研] 总分293求调剂 +8 加一一九 2026-03-25 11/550 2026-03-29 19:53 by 无际的草原
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
[考研] 本科双非材料,跨考一志愿华电085801电气,283求调剂,任何专业都可以 +6 芝士雪baoo 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:16 by 松花缸1201
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 本科新能源科学与工程,一志愿华理能动285求调剂 +7 AZMK 2026-03-28 11/550 2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 343求调剂 +5 爱羁绊 2026-03-28 5/250 2026-03-28 20:53 by 唐沐儿
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-27 6/300 2026-03-28 14:10 by 唐沐儿
[考研] 317求调剂 +6 十闲wx 2026-03-24 6/300 2026-03-28 13:27 by Iveryant
[考研] 求调剂 +6 芦lty 2026-03-25 7/350 2026-03-28 13:13 by 唐沐儿
[考研] 265求调剂11408 +3 刘小鹿lu 2026-03-27 3/150 2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 085600,材料与化工321分调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 6/300 2026-03-27 14:11 by 松花缸1201
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
信息提示
请填处理意见