14楼: Originally posted by mlxmiao at 2017-10-13 12:03:53
随便帮你选了一段序列，具体可以参照NCBI上的在线软件
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/primertool.cgi?ctg_time=1507856996&job_key=09kMhZmNlCWzG5EenH61LOZlpB7Ldr8Dyg

大.png
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21楼: Originally posted by 林小露 at 2017-10-13 20:56:13
大神，请问在ncbi在线设计引物还需要验证吗？还是可以直接用？...

20楼: Originally posted by 林小露 at 2017-10-13 20:01:16
如果我要用酶切法。然后引物设计在起始密码子和终止密码子两侧，这样可以吗/，因为设计在两侧的引物条件貌似比在起始、终止密码子上设计的引物好一点...

23楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-13 22:25:25
如果用酶切法做，还要加酶切位点和保护碱基，设计好后单条引物长度不要大于35bp就行，设计这种载体引物不用考虑那么多，设计出来试就可以了。另外载体引物一般不会像你说的在两侧设计……
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22楼: Originally posted by mlxmiao at 2017-10-13 21:33:33
我不验证，如果认为不保险，可以多设计几对引物
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22楼: Originally posted by mlxmiao at 2017-10-13 21:33:33
我不验证，如果认为不保险，可以多设计几对引物
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22楼: Originally posted by mlxmiao at 2017-10-13 21:33:33
我不验证，如果认为不保险，可以多设计几对引物
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24楼: Originally posted by 林小露 at 2017-10-14 09:00:11
那么设计出来后两者的Tm值相差太大的话，PCR中的温度应该如何设置呢？
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28楼: Originally posted by didongwei at 2017-10-14 22:55:32
这个要试，一般先以低的那个作参考，在其基础上降低1到2度，然后扩增，如果没有杂带就可以，如果有杂带就逐渐提高温度，直至没有杂带为止，如果温度调到扩增不出来，也还是没有合适温度就更换引物，主要是换酶切位 ...