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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » IPTG诱导蛋白表达
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星星chanyeol

新虫 (初入文坛)

[求助] IPTG诱导蛋白表达 已有8人参与

图片第一条marker 前两条是1mM IPTG 后两条是0.6mM IPTG诱导。pET-28a是我的载体 目的蛋白77KD。就是诱导不出来，之前也用37摄氏度试过也不行 。我都急死了。拜托大虾帮我看看 十分感谢

IPTG诱导蛋白表达


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1楼 2017-09-23 15:11:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-23 20:40:22
不知道各个泳道的样品是什么？如果2和4泳道是全细胞，3和5泳道是空载，那么第二泳道和四泳道比三泳道和5泳道多出来一条带，大小差不多77，应该诱导出来了！

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2楼2017-09-23 15:43:15
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re-take

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你确定泳道没标错，0.6mM IPTG 是不是有点高了，可以尝试从1mM、0.8、0.6一直到0.1都试一下，然后温度20，18,16度也试一下，我们一般16度诱导过夜。还有你用的表达菌株是啥，实在不行换个载体，或者换真核表达试一试。
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船到桥头自然直
6楼2017-09-27 17:04:52
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Tsingavin

木虫 (小有名气)
空载对照怎么没有跑？
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分享是一种快乐
7楼2017-09-30 10:18:24
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飘零星lin

金虫 (小有名气)
看起来有有诱岛表达出来。可以试着纯化，或者做个WB鉴定。

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8楼2017-10-08 21:39:42
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soarshining

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 星星chanyeol at 2017-09-24 13:59:10
2 4是空载，3 5才是我的诱导产物。
...

降低IPTG浓度试试吧，我们一般就用0.25 mM，然后是26度过夜。另外你的蛋白是否是多亚基的，如果多亚基那sds-page看到的大小可能不是77，因为感觉31marker上方很近的地方有浅浅的加深的感觉，建议也加个空载看看更合理。
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9楼2017-10-09 13:52:08
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
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12楼2017-11-10 14:13:34
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普通回帖

wenyi1991113

铁杆木虫 (正式写手)
看起来是诱导出来了

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鱼与熊掌不可兼得
3楼2017-09-23 22:13:11
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hhz09423

金虫 (正式写手)
纯化下试试

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4楼2017-09-24 12:28:22
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星星chanyeol

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xl0071334 at 2017-09-23 15:43:15
不知道各个泳道的样品是什么？如果2和4泳道是全细胞，3和5泳道是空载，那么第二泳道和四泳道比三泳道和5泳道多出来一条带，大小差不多77，应该诱导出来了！

2 4是空载，3 5才是我的诱导产物。

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5楼2017-09-24 13:59:10
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星星chanyeol

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Tsingavin at 2017-09-30 10:18:24
空载对照怎么没有跑？

2 4是空载

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10楼2017-10-09 13:55:06
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