应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » IPTG诱导蛋白表达
151/2返回列表12下一页
查看: 6591  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

星星chanyeol

新虫 (初入文坛)

[求助] IPTG诱导蛋白表达 已有8人参与

图片第一条marker 前两条是1mM IPTG 后两条是0.6mM IPTG诱导。pET-28a是我的载体 目的蛋白77KD。就是诱导不出来，之前也用37摄氏度试过也不行 。我都急死了。拜托大虾帮我看看 十分感谢

IPTG诱导蛋白表达


发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-09-23 15:11:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-23 20:40:22
不知道各个泳道的样品是什么？如果2和4泳道是全细胞，3和5泳道是空载，那么第二泳道和四泳道比三泳道和5泳道多出来一条带，大小差不多77，应该诱导出来了！

发自小木虫Android客户端
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2017-09-23 15:43:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

re-take

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你确定泳道没标错，0.6mM IPTG 是不是有点高了，可以尝试从1mM、0.8、0.6一直到0.1都试一下，然后温度20，18,16度也试一下，我们一般16度诱导过夜。还有你用的表达菌株是啥，实在不行换个载体，或者换真核表达试一试。
赞一下(1人) 回复此楼
船到桥头自然直
6楼2017-09-27 17:04:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tsingavin

木虫 (小有名气)
空载对照怎么没有跑？
赞一下(1人) 回复此楼
分享是一种快乐
7楼2017-09-30 10:18:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零星lin

金虫 (小有名气)
看起来有有诱岛表达出来。可以试着纯化，或者做个WB鉴定。

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2017-10-08 21:39:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soarshining

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 星星chanyeol at 2017-09-24 13:59:10
2 4是空载，3 5才是我的诱导产物。
...

降低IPTG浓度试试吧，我们一般就用0.25 mM，然后是26度过夜。另外你的蛋白是否是多亚基的，如果多亚基那sds-page看到的大小可能不是77，因为感觉31marker上方很近的地方有浅浅的加深的感觉，建议也加个空载看看更合理。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2017-10-09 13:52:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
12楼2017-11-10 14:13:34
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
普通回帖

wenyi1991113

铁杆木虫 (正式写手)
看起来是诱导出来了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
鱼与熊掌不可兼得
3楼2017-09-23 22:13:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhz09423

金虫 (正式写手)
纯化下试试

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
4楼2017-09-24 12:28:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星星chanyeol

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xl0071334 at 2017-09-23 15:43:15
不知道各个泳道的样品是什么？如果2和4泳道是全细胞，3和5泳道是空载，那么第二泳道和四泳道比三泳道和5泳道多出来一条带，大小差不多77，应该诱导出来了！

2 4是空载，3 5才是我的诱导产物。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-09-24 13:59:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星星chanyeol

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Tsingavin at 2017-09-30 10:18:24
空载对照怎么没有跑？

2 4是空载

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
10楼2017-10-09 13:55:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 星星chanyeol 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 河北省自然科学基金 +5 Peterchao 2026-05-18 8/400 2026-05-24 11:58 by 晓晓爱翠翠
[基金申请] 西安交大新媒学院副院长用撤稿论文结题 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:16 by kudofaye
[教师之家] 论文撤稿了 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:06 by Equinoxhua
[教师之家] 某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路！ +4 zju2000 2026-05-21 5/250 2026-05-24 09:35 by songwz
[考博] 26/27申博自荐 10+4 ZXW0202 2026-05-22 9/450 2026-05-24 08:47 by bjvtcliu
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hvkbtfonbv 2026-05-23 3/150 2026-05-24 08:01 by 9ps9vgkqva
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 pmo95bazuy 2026-05-23 7/350 2026-05-24 06:35 by fpo5ljpv91
[基金申请] 揭秘青基评审内幕：几个A才能顺利中标 +3 国自然国社科中 2026-05-23 4/200 2026-05-23 15:37 by 2000zf36392
[基金申请] 青B发送上会通知了吗 +5 chemBioBro 2026-05-22 7/350 2026-05-23 12:35 by zhuifengzhy
[考博] 博士申请 +3 焦晓明 2026-05-21 3/150 2026-05-23 11:26 by mlc840311
[论文投稿] 投稿求助，期刊 +4 希冀，有书读 2026-05-20 8/400 2026-05-22 10:16 by 希冀，有书读
[文学芳草园] 献血感触 +7 呀呀好傻 2026-05-19 13/650 2026-05-21 20:15 by 呀呀好傻
[基金申请] 面上本子正文33页，违规吗？会被低分嘛？ +14 1234567wang 2026-05-17 16/800 2026-05-21 17:58 by 脆脆的饼干
[基金申请] 国自然评分 +4 无名者登山 2026-05-20 5/250 2026-05-21 16:35 by swuq
[基金申请] 国自然上会要求 +7 无名者登山 2026-05-18 11/550 2026-05-21 15:50 by draco1987
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +9 fummck 2026-05-20 10/500 2026-05-21 14:17 by draco1987
[基金申请] 评审有感 +15 popular289 2026-05-18 26/1300 2026-05-21 10:35 by 西葫芦炒鸡蛋
[有机交流] 反应很差，大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[考博] 如果工作了想读博，可以边工作边读全日制嘛？ 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭