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[交流]
蛋白纯化凝血酶酶切
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各位虫友好，我最近在做蛋白质晶体结构，现在有一个蛋白原核表达后需要切除His标签，载体是pET28a，我想问酶切体系是怎么样的，蛋白浓缩后（体积大约为1ml）再切呢还是从Ni柱上洗脱后（体积约为30ml）直接切；切完之后怎么去除凝血酶呢和切下来的标签6个组氨酸短肽呢？ 发自小木虫IOS客户端 |
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hhz09423
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2楼2017-09-14 23:05:51
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本是烟: 金币+5 2017-09-15 07:22:31
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蛋白洗脱下来后直接切，我做的时候就是直接把酶加几微升到你的洗脱液中，4℃过夜，再用手推的方式过一下ni柱，下来的就是切过的目的蛋白了。不过买凝血酶记得买带his标签的！ 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-09-14 23:54:01
4楼2017-09-15 07:23:48
fanggk
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Jemima2020
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6楼2020-10-12 17:35:39