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本是烟

新虫 (小有名气)

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[交流] 蛋白纯化凝血酶酶切

各位虫友好，我最近在做蛋白质晶体结构，现在有一个蛋白原核表达后需要切除His标签，载体是pET28a，我想问酶切体系是怎么样的，蛋白浓缩后（体积大约为1ml）再切呢还是从Ni柱上洗脱后（体积约为30ml）直接切；切完之后怎么去除凝血酶呢和切下来的标签6个组氨酸短肽呢？

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1楼 2017-09-14 14:57:20

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hhz09423

金虫 (正式写手)

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拿到目的蛋白，酶切再挂ni柱

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2楼2017-09-14 23:05:51

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咪咪黑

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本是烟: 金币+5 2017-09-15 07:22:31

引用回帖:

1楼: Originally posted by 本是烟 at 2017-09-14 14:57:20
各位虫友好，我最近在做蛋白质晶体结构，现在有一个蛋白原核表达后需要切除His标签，载体是pET28a，我想问酶切体系是怎么样的，蛋白浓缩后（体积大约为1ml）再切呢还是从Ni柱上洗脱后（体积约为30ml）直接切；切完之 ...

蛋白洗脱下来后直接切，我做的时候就是直接把酶加几微升到你的洗脱液中，4℃过夜，再用手推的方式过一下ni柱，下来的就是切过的目的蛋白了。不过买凝血酶记得买带his标签的！

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3楼2017-09-14 23:54:01

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