24小时热门版块排行榜

返回列表

本是烟

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 301
散金: 5
帖子: 98
在线: 4.7小时
虫号: 5110808
注册: 2016-10-12
性别: MM
专业: 抗肿瘤药物药理

[交流] 蛋白纯化凝血酶酶切

各位虫友好，我最近在做蛋白质晶体结构，现在有一个蛋白原核表达后需要切除His标签，载体是pET28a，我想问酶切体系是怎么样的，蛋白浓缩后（体积大约为1ml）再切呢还是从Ni柱上洗脱后（体积约为30ml）直接切；切完之后怎么去除凝血酶呢和切下来的标签6个组氨酸短肽呢？

发自小木虫IOS客户端

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

紧急求助：用凝血酶切GST时，但目标蛋白短时间内被降解，怎么回事？已经有3人回复
目的蛋白沉淀已经有1人回复
【求助】新手求助！关于蛋白质异源表达纯化的问题已经有4人回复
求助GST纯化，凝血酶酶切！谢谢已经有6人回复
切除GST标签蛋白的纯化已经有14人回复
【分享】蛋白质纯化个人总结2 已经有38人回复
【求助/交流】谁知道如何去除GST标签啊，帮帮忙啊，急！已经有4人回复

1楼 2017-09-14 14:57:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

hhz09423

金虫 (正式写手)

应助: 27 (小学生)
金币: 7649.8
红花: 1
帖子: 733
在线: 152.4小时
虫号: 2311244
注册: 2013-03-02
性别: GG
专业: 药理学其他科学问题

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

拿到目的蛋白，酶切再挂ni柱

发自小木虫IOS客户端

赞一下(1人)

回复此楼

2楼2017-09-14 23:05:51

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

咪咪黑

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 140.1
帖子: 27
在线: 2.1小时
虫号: 7186246
注册: 2017-09-14
专业: 细胞信号转导

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本是烟: 金币+5 2017-09-15 07:22:31

引用回帖:

1楼: Originally posted by 本是烟 at 2017-09-14 14:57:20
各位虫友好，我最近在做蛋白质晶体结构，现在有一个蛋白原核表达后需要切除His标签，载体是pET28a，我想问酶切体系是怎么样的，蛋白浓缩后（体积大约为1ml）再切呢还是从Ni柱上洗脱后（体积约为30ml）直接切；切完之 ...

蛋白洗脱下来后直接切，我做的时候就是直接把酶加几微升到你的洗脱液中，4℃过夜，再用手推的方式过一下ni柱，下来的就是切过的目的蛋白了。不过买凝血酶记得买带his标签的！

发自小木虫Android客户端

赞一下(2人)

回复此楼

3楼2017-09-14 23:54:01

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖