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载体和目的基因连接不上啊，一学期了，求助 已有8人参与
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载体4.4k，目的基因是易错pcr的产物1.4k，载体和目的基因都经过双酶切3个小时，然后胶回收，载体浓度10ng/微升，目的基因14ng/微升，之后按照物质的量比1:6进行连接，t4连接酶过夜，然后做转化，感受态是买的trans10，完全不长菌啊，求助 发自小木虫IOS客户端 |
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50楼2017-05-29 00:46:11
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3楼2017-05-24 17:33:42
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做的同时，可以有一组实验直接用质粒转化感受态细胞看下转化活力，如果转化后菌落较少，也会影响你的连接片段转化效率，比较你的片段较长 发自小木虫IOS客户端 |
18楼2017-05-25 10:41:17
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9楼2017-05-24 22:15:47
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【答案】应助回帖
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载体与片段比是0.02??载体大小bp 比0.06??片段大小bp。我一般不测浓度，而是通过电泳判断，1:2或者1:3的比例做。 发自小木虫IOS客户端 |
10楼2017-05-24 23:22:17
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