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李逆熵

新虫 (正式写手)

11楼2017-05-24 23:29:40
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谢大旭

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 李逆熵 at 2017-05-24 23:29:40
末端不会反了吧

什么意思呢?

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12楼2017-05-25 08:49:27
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十年十天

新虫 (小有名气)

一方面你的目的基因基本上算是有点长的,不过还好。下次双酶切前可以把质粒浓度提高,尽量多的获得大片段和小片段,还有感受态可以试DHC5a

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13楼2017-05-25 09:19:24
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

可以用pcr产物回收试剂盒回收酶切后的产物和载体,胶回收损失太大也要看一下你的酶能不能双切,浓度不是太大的问题,需不需要加BSA?连接的温度?

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14楼2017-05-25 10:03:05
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

浓度大小不影响连接结果

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15楼2017-05-25 10:03:29
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飞翔的吉大人

新虫 (初入文坛)

试试载体片段1:10,又或者体系不加ddH2O

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16楼2017-05-25 10:39:03
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飞翔的吉大人

新虫 (初入文坛)

不加水,把你回收的片段全部加进去,载体有一点就可以

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17楼2017-05-25 10:39:42
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幻影望晴

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-27 07:37:52
做的同时,可以有一组实验直接用质粒转化感受态细胞看下转化活力,如果转化后菌落较少,也会影响你的连接片段转化效率,比较你的片段较长

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18楼2017-05-25 10:41:17
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寰宇清

新虫 (小有名气)

19楼2017-05-25 11:23:38
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54zhongling

新虫 (初入文坛)

目的基因直接纯化,不切胶,多挑些单克隆试试

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20楼2017-05-25 14:12:47
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