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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体和目的基因连接不上啊，一学期了，求助
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lingorling

铁虫 (小有名气)
我建议直接先测一下感受态的活性。有的时候一批感受态都不好用，这样的话可以换不同批次的感受态。

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41楼2017-05-27 07:15:15
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tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)
拿来，我帮你做！

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42楼2017-05-27 07:45:08
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谢大旭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
41楼: Originally posted by lingorling at 2017-05-27 07:15:15
我建议直接先测一下感受态的活性。有的时候一批感受态都不好用，这样的话可以换不同批次的感受态。

活性测过了，活性可以的

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43楼2017-05-27 09:46:23
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biotianyanan

银虫 (小有名气)
浓度太低，推荐你可以用重组法构载体

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开心每一天，科研小宇宙
44楼2017-05-28 12:54:34
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反对派

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 谢大旭 at 2017-05-24 18:11:14
做连接载体和目的基因加多少ng呢
...

把载体和目的基因寄给我，我帮你做

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45楼2017-05-28 13:05:34
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反对派

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我可以帮你很快做出来

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46楼2017-05-28 13:12:25
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54zhongling

新虫 (初入文坛)
PCR产物直接纯化

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47楼2017-05-28 14:58:15
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王查查23

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
48楼2017-05-28 18:28:13
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铭记于心2222

铜虫 (初入文坛)
总的体系150-200ng

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49楼2017-05-29 00:24:10
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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得首先你得确定载体和目的片段是否连接上。然后再确定是不是转化的问题（如果实验室其他人的转化没问题，你的应该也不会有问题）。
所以，连接完后 你可以取1-2ul的连接产物为模板，用载体上的引物做一轮PCR，看看是否扩增出你的目的片段。
如果有目的条带，说明你的片段已经连上载体了，连接反应没问题。如果感受态没问题，你再确认下抗性之类的有没有问题；
如果没有目的条带，说明没有连上，那你就换其他方法。推荐诺唯赞（Vazyme）的一步法试剂盒，效率高，便宜。
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
50楼2017-05-29 00:46:11
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