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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 大肠表达包涵体复性问题
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ss000qq

金虫 (正式写手)

[求助] 大肠表达包涵体复性问题 已有3人参与

虫友们好，

      最近再用pET-28a载体(BL21 DE3宿主)表达外源的原核蛋白，但是形成包涵体，后面降低了诱导剂溶度及温度(0.01mM IPTG诱导，20℃，低OD=0.2-0.3时诱导)，但是包涵体的情形仍没有改善。在这里向大家请教，哪位大牛能帮忙想想办法？

     我的目的蛋白是双亚基(异亚基)。原始氨基酸序列是信号肽+α亚基+连接肽+β亚基。蛋白成熟过程中连接肽经剪切，仅剩α亚基和β亚基相连。不知道我现在表达形成的包涵体连接肽有没有被剪切，如果采取包涵体复性，蛋白不知道有没有活性。
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ss000qq

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1楼 2017-05-04 14:55:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

笨笨的仙女

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我的和你的一样，序列中含有信号肽，一直在包涵体中表达，上清中没有，不知道怎么解决，你可有新的方法来解决，可以和我共享吗

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5楼2017-05-28 22:00:26
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普通回帖

ss000qq

金虫 (正式写手)
送红花一朵
2楼2017-05-04 14:55:24
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煮书泼茶

新虫 (初入文坛)
我的也是在包涵体，不知道要怎么复性呢

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3楼2017-05-12 22:48:24
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elabscience

新虫 (小有名气)
想只知道答案
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专注科学研究
4楼2017-05-13 11:15:44
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李四少

新虫 (初入文坛)
直接用8M尿素变性在复性

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6楼2017-06-18 19:14:34
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

从2.4.6.8MOL尿素开始变性，在透析复性。huo
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采菊东篱下，悠然见南山。
7楼2017-06-19 08:28:07
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)
重新克隆，拿掉信号肽看看结果再说。
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8楼2017-06-20 09:25:03
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浩月照沧海

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 煮书泼茶 at 2017-05-12 22:48:24
我的也是在包涵体，不知道要怎么复性呢

兄弟 ，你的包涵体蛋白  怎么复兴的啊
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9楼2017-07-15 10:16:32
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浩月照沧海

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 781055707 at 2017-06-19 08:28:07
从2.4.6.8MOL尿素开始变性，在透析复性。huo

复性过程中会有大量沉淀  有蛋白析出怎么破
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10楼2017-07-15 10:17:40
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