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ss000qq

金虫 (正式写手)


[求助] 大肠表达包涵体复性问题 已有3人参与

虫友们好,

      最近再用pET-28a载体(BL21 DE3宿主)表达外源的原核蛋白,但是形成包涵体,后面降低了诱导剂溶度及温度(0.01mM IPTG诱导,20℃,低OD=0.2-0.3时诱导),但是包涵体的情形仍没有改善。在这里向大家请教,哪位大牛能帮忙想想办法?

     我的目的蛋白是双亚基(异亚基)。原始氨基酸序列是信号肽+α亚基+连接肽+β亚基。蛋白成熟过程中连接肽经剪切,仅剩α亚基和β亚基相连。不知道我现在表达形成的包涵体连接肽有没有被剪切,如果采取包涵体复性,蛋白不知道有没有活性。
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煮书泼茶

新虫 (初入文坛)

我的也是在包涵体,不知道要怎么复性呢

发自小木虫Android客户端
3楼2017-05-12 22:48:24
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ss000qq

金虫 (正式写手)

送红花一朵
2楼2017-05-04 14:55:24
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笨笨的仙女

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我的和你的一样,序列中含有信号肽,一直在包涵体中表达,上清中没有,不知道怎么解决,你可有新的方法来解决,可以和我共享吗

发自小木虫Android客户端
5楼2017-05-28 22:00:26
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李四少

新虫 (初入文坛)

6楼2017-06-18 19:14:34
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