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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 在大肠杆菌里表达酶，形成了包涵体，结果酶没有活性，求大神指教！！
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小敏1990110

新虫 (小有名气)

[求助] 在大肠杆菌里表达酶，形成了包涵体，结果酶没有活性，求大神指教！！ 已有1人参与

用的pet32a载体加入的tag标签，酶已经纯化的比较好了，复性的时候透析MES缓冲液里，可是就是没有活性，不知道问题出在了哪里？
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爱生活，爱自己。
1楼 2014-11-25 10:04:23
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lpzl

木虫 (正式写手)
同求啊。。。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-11-25 10:05:34
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蠹鱼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小敏1990110: 金币+20 2014-11-26 20:38:02
粗酶液有活性吗？
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少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。
3楼2014-11-26 20:21:31
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小敏1990110

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-11-26 20:21:31
粗酶液有活性吗？

没有试过，不过是用的尿素溶解的包涵体，还没有复性，应该是没有的吧，现在感觉是出在复性上面
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爱生活，爱自己。
4楼2014-11-26 20:37:45
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小敏1990110

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蠹鱼 at 2014-11-26 20:21:31
粗酶液有活性吗？

你之前有过这方面的研究嘛？做了将近一年，现在酶没有活性，导师要求换课题，还是有点不甘心，，，多指教
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爱生活，爱自己。
5楼2014-11-26 20:40:15
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蠹鱼

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 19:58:37
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小敏1990110 at 2014-11-26 20:40:15
你之前有过这方面的研究嘛？做了将近一年，现在酶没有活性，导师要求换课题，还是有点不甘心，，，多指教...

我平时也用pET32,21,28等，一般都加上his-tag（当然32不用了）。我所做的酶不需要复性，直接可以表达的。我的酶如果不表达或者没有活性，会尝试不同诱导条件，不同载体。到时没有研究过复性，你的酶难道不能直接表达吗？
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少一分浮躁，多一分踏实。少一分侥幸，多一分努力。
6楼2014-11-26 21:07:26
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simengsmile

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 19:58:46
超声波破碎，离心，然后建议把离心后的沉淀重悬与娃哈哈水，然后上清，重悬液，以及粗酶液一起跑电泳试试，可能酶活在沉淀中（也就是形成包涵体，再设计方法除去包涵体）
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7楼2014-11-27 11:14:20
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myheat

铜虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-27 19:58:57
包涵体的话直接用28，用32有trxb对复性没有帮助

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8楼2014-11-27 11:54:25
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