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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

[求助] 启动子克隆的相关问题 已有3人参与

最近在做启动子的克隆,设计了好几对引物,其中一对引物有目的条带,我就把它回收回来,然后与T载体连接,转化,涂板,挑单克隆,做PCR检测,然后阳性单克隆摇菌提质粒,做了酶切检测,也是对的,但是拿去测序后,结果不是我要的结果,这应该怎么办呢?存在什么样的问题?
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meng蓝色桃子

新虫 (初入文坛)

克启动子经常会遇到这样的问题,重新跑PCR,可以考虑换高保增酶

发自小木虫Android客户端
3楼2017-05-04 00:11:27
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海燕追梦

新虫 (正式写手)

10楼2017-05-17 21:16:47
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123小木鱼

新虫 (初入文坛)

也在克隆启动子,遇到同样的问题,快郁闷死了
11楼2018-01-15 10:37:39
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普通回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

2楼2017-04-25 15:42:10
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-18 07:43:13
可能是引物不够特异,你可以调取比较长的片段,然后设计特异性更好的引物再扩增。那怕是扩增到utr或者基因里面也行。然后重新做。

发自小木虫Android客户端
特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
4楼2017-05-04 00:15:07
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纪孟君

新虫 (初入文坛)

想知道解决了没,我也遇到相同的情况

发自小木虫Android客户端
大雨也要等到晴朗
5楼2017-05-05 19:25:04
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by meng蓝色桃子 at 2017-05-04 00:11:27
克启动子经常会遇到这样的问题,重新跑PCR,可以考虑换高保增酶

我已经换了4对引物了,然而还是没有扩增出来,条带很杂乱,感觉没有目的条带,而且也换过KOD酶试过,还是不行。
6楼2017-05-17 20:35:59
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 纪孟君 at 2017-05-05 19:25:04
想知道解决了没,我也遇到相同的情况

还是没有解决呢
7楼2017-05-17 20:36:23
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2017-05-04 00:15:07
可能是引物不够特异,你可以调取比较长的片段,然后设计特异性更好的引物再扩增。那怕是扩增到utr或者基因里面也行。然后重新做。

我换过引物,扩增的长度也有大有小,然而还是扩不出来
8楼2017-05-17 20:37:11
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暖暖岁月

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不知您问题解决没,一般情况下换用高保真酶,克隆鉴订结果条带一样但测序结果不一样一般再重设引物就行了。我遇到过这种问题。
9楼2017-05-17 20:44:09
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