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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 启动子克隆的相关问题
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

[求助] 启动子克隆的相关问题 已有3人参与

最近在做启动子的克隆，设计了好几对引物，其中一对引物有目的条带，我就把它回收回来，然后与T载体连接，转化，涂板，挑单克隆，做PCR检测，然后阳性单克隆摇菌提质粒，做了酶切检测，也是对的，但是拿去测序后，结果不是我要的结果，这应该怎么办呢？存在什么样的问题？
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1楼 2017-04-25 11:28:55
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meng蓝色桃子

新虫 (初入文坛)
克启动子经常会遇到这样的问题，重新跑PCR，可以考虑换高保增酶

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3楼2017-05-04 00:11:27
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海燕追梦

新虫 (正式写手)
启动子弄的我都想哭

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10楼2017-05-17 21:16:47
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123小木鱼

新虫 (初入文坛)
也在克隆启动子，遇到同样的问题，快郁闷死了
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11楼2018-01-15 10:37:39
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普通回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
换一对测序引物

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2楼2017-04-25 15:42:10
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-18 07:43:13
可能是引物不够特异，你可以调取比较长的片段，然后设计特异性更好的引物再扩增。那怕是扩增到utr或者基因里面也行。然后重新做。

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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
4楼2017-05-04 00:15:07
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纪孟君

新虫 (初入文坛)
想知道解决了没，我也遇到相同的情况

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大雨也要等到晴朗
5楼2017-05-05 19:25:04
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by meng蓝色桃子 at 2017-05-04 00:11:27
克启动子经常会遇到这样的问题，重新跑PCR，可以考虑换高保增酶

我已经换了4对引物了，然而还是没有扩增出来，条带很杂乱，感觉没有目的条带，而且也换过KOD酶试过，还是不行。
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6楼2017-05-17 20:35:59
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 纪孟君 at 2017-05-05 19:25:04
想知道解决了没，我也遇到相同的情况

还是没有解决呢
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7楼2017-05-17 20:36:23
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2017-05-04 00:15:07
可能是引物不够特异，你可以调取比较长的片段，然后设计特异性更好的引物再扩增。那怕是扩增到utr或者基因里面也行。然后重新做。

我换过引物，扩增的长度也有大有小，然而还是扩不出来
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8楼2017-05-17 20:37:11
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暖暖岁月

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不知您问题解决没，一般情况下换用高保真酶，克隆鉴订结果条带一样但测序结果不一样一般再重设引物就行了。我遇到过这种问题。
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9楼2017-05-17 20:44:09
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