应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 启动子克隆的相关问题
151/2返回列表12下一页
查看: 2508  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

[求助] 启动子克隆的相关问题 已有3人参与

最近在做启动子的克隆，设计了好几对引物，其中一对引物有目的条带，我就把它回收回来，然后与T载体连接，转化，涂板，挑单克隆，做PCR检测，然后阳性单克隆摇菌提质粒，做了酶切检测，也是对的，但是拿去测序后，结果不是我要的结果，这应该怎么办呢？存在什么样的问题？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-04-25 11:28:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

meng蓝色桃子

新虫 (初入文坛)
克启动子经常会遇到这样的问题，重新跑PCR，可以考虑换高保增酶

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-05-04 00:11:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海燕追梦

新虫 (正式写手)
启动子弄的我都想哭

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2017-05-17 21:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

123小木鱼

新虫 (初入文坛)
也在克隆启动子，遇到同样的问题，快郁闷死了
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2018-01-15 10:37:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
换一对测序引物

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2017-04-25 15:42:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-18 07:43:13
可能是引物不够特异，你可以调取比较长的片段，然后设计特异性更好的引物再扩增。那怕是扩增到utr或者基因里面也行。然后重新做。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
4楼2017-05-04 00:15:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纪孟君

新虫 (初入文坛)
想知道解决了没，我也遇到相同的情况

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
大雨也要等到晴朗
5楼2017-05-05 19:25:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪鸢-lx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by meng蓝色桃子 at 2017-05-04 00:11:27
克启动子经常会遇到这样的问题，重新跑PCR，可以考虑换高保增酶

我已经换了4对引物了，然而还是没有扩增出来，条带很杂乱，感觉没有目的条带，而且也换过KOD酶试过，还是不行。
赞一下 回复此楼
6楼2017-05-17 20:35:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪鸢-lx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 纪孟君 at 2017-05-05 19:25:04
想知道解决了没，我也遇到相同的情况

还是没有解决呢
回复此楼
7楼2017-05-17 20:36:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪鸢-lx

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2017-05-04 00:15:07
可能是引物不够特异，你可以调取比较长的片段，然后设计特异性更好的引物再扩增。那怕是扩增到utr或者基因里面也行。然后重新做。

我换过引物，扩增的长度也有大有小，然而还是扩不出来
赞一下 回复此楼
8楼2017-05-17 20:37:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

暖暖岁月

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不知您问题解决没，一般情况下换用高保真酶，克隆鉴订结果条带一样但测序结果不一样一般再重设引物就行了。我遇到过这种问题。
赞一下 回复此楼
9楼2017-05-17 20:44:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雪鸢-lx 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 305分求调剂（食品工程） +3 Sxy112 2026-03-21 5/250 2026-03-22 11:35 by 杨杨杨紫
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 324求调剂 +5 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 5/250 2026-03-20 22:30 by 促天成
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭