| 查看: 595 | 回复: 0 | ||
[求助]
体外转录检测敏感性问题
|
| 本人投了一篇文章，由于做的病毒体外极难培养，且是RNA病毒，故从病料中提取RNA后，经PCR扩增后克隆于pMD18-T上，稀释重组质粒换算拷贝数以检测病毒敏感性，而报社编辑说：实验中存在技术性缺陷，即检测 RNA 病毒却采用重组质粒（ DNA ）作为模板进行标准曲线建立和敏感性试验，由于 RNA 在反转录制备 cDNA 过程中的效率并不是 100% ，对于不能够体外培养的 RNA 病毒，则可以通过检测的靶基因克隆于含有体外转录的 T7 或 T3 启动子质粒中（如 pGEM-T 系列质粒），提取含有目的基因的重组质粒，检测其相关的 OD 值，通过公式计算其重组质粒的拷贝数后，采用体外转录试剂盒进行 RNA 的转录。将体外制备的 RNA 转录为模板进行反转录，制备 cDNA ，并将其进行倍比系列稀释，分别以不同稀释度的 cDNA 作为模板进行荧光定量 PCR 扩增确定其检测的敏感性。 我的问题是：1.直接拿体外转录获得的RNA进行稀释来做敏感性试验不行吗？为什么要用它再次反转录cDNA来检测敏感性？ 这么做严谨吗？ 2.体外转录获得的RNA再反转录成cDNA这样折腾一遍不是跟编辑说的RNA 在反转录 cDNA 过程中的效率并不是 100%又一样了吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
解密度鲁特韦——新一代HIV整合酶抑制剂的化学、药理与产业化图景
已经有0人回复
-
左炔诺孕酮从沃氏氧化物到炔基化反应的工艺迭代与靶点解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有58人回复
-
“关闭瘙痒信号”的多肽地非法林醋酸盐全解析
已经有1人回复
-
Tosylate-DPA-714介导¹⁸F-DPA-714 PET成像的前沿进展
已经有0人回复
-
I-BRD9: BRD9溴结构域化学探针，BET选择性>700倍
已经有0人回复
-
莫那利珠单抗阻断NKG2A/HLA-E抑制通路 | Biochempartner
已经有0人回复
-
GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner
已经有0人回复
-
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner
已经有0人回复
-
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner
已经有0人回复
-
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
