| 查看: 569 | 回复: 0 | ||
[求助]
体外转录检测敏感性问题
|
| 本人投了一篇文章,由于做的病毒体外极难培养,且是RNA病毒,故从病料中提取RNA后,经PCR扩增后克隆于pMD18-T上,稀释重组质粒换算拷贝数以检测病毒敏感性,而报社编辑说:实验中存在技术性缺陷,即检测 RNA 病毒却采用重组质粒( DNA )作为模板进行标准曲线建立和敏感性试验,由于 RNA 在反转录制备 cDNA 过程中的效率并不是 100% ,对于不能够体外培养的 RNA 病毒,则可以通过检测的靶基因克隆于含有体外转录的 T7 或 T3 启动子质粒中(如 pGEM-T 系列质粒),提取含有目的基因的重组质粒,检测其相关的 OD 值,通过公式计算其重组质粒的拷贝数后,采用体外转录试剂盒进行 RNA 的转录。将体外制备的 RNA 转录为模板进行反转录,制备 cDNA ,并将其进行倍比系列稀释,分别以不同稀释度的 cDNA 作为模板进行荧光定量 PCR 扩增确定其检测的敏感性。 我的问题是:1.直接拿体外转录获得的RNA进行稀释来做敏感性试验不行吗?为什么要用它再次反转录cDNA来检测敏感性? 这么做严谨吗? 2.体外转录获得的RNA再反转录成cDNA这样折腾一遍不是跟编辑说的RNA 在反转录 cDNA 过程中的效率并不是 100%又一样了吗? |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
化学工程,本211,求调剂,ab区不限
已经有4人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有122人回复
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物,制药工程,食品专业的调剂生
已经有0人回复
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
化工申博
已经有3人回复













回复此楼