| 查看: 557 | 回复: 0 | |||
[求助]
体外转录检测敏感性问题
|
| 本人投了一篇文章，由于做的病毒体外极难培养，且是RNA病毒，故从病料中提取RNA后，经PCR扩增后克隆于pMD18-T上，稀释重组质粒换算拷贝数以检测病毒敏感性，而报社编辑说：实验中存在技术性缺陷，即检测 RNA 病毒却采用重组质粒（ DNA ）作为模板进行标准曲线建立和敏感性试验，由于 RNA 在反转录制备 cDNA 过程中的效率并不是 100% ，对于不能够体外培养的 RNA 病毒，则可以通过检测的靶基因克隆于含有体外转录的 T7 或 T3 启动子质粒中（如 pGEM-T 系列质粒），提取含有目的基因的重组质粒，检测其相关的 OD 值，通过公式计算其重组质粒的拷贝数后，采用体外转录试剂盒进行 RNA 的转录。将体外制备的 RNA 转录为模板进行反转录，制备 cDNA ，并将其进行倍比系列稀释，分别以不同稀释度的 cDNA 作为模板进行荧光定量 PCR 扩增确定其检测的敏感性。 我的问题是：1.直接拿体外转录获得的RNA进行稀释来做敏感性试验不行吗？为什么要用它再次反转录cDNA来检测敏感性？ 这么做严谨吗？ 2.体外转录获得的RNA再反转录成cDNA这样折腾一遍不是跟编辑说的RNA 在反转录 cDNA 过程中的效率并不是 100%又一样了吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有183人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
